[发明专利]贻贝酶解多肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种贻贝酶解多肽，其特征在于包含如下氨基酸序列：

Asp Leu Tyr。

2.一种如权利要求1所述贻贝酶解多肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

①取贻贝肉，制成均浆，调节pH值9.5～10，料液比为1∶2～1∶3，添加碱性蛋白酶，加酶量为1500～2000U/g，酶解时间为6～8小时，酶解温度为45～50℃，灭酶后离心，取上层清液；

②将上述的清液经过超滤，收集分子量3K以下的水解液，浓缩并冷冻干燥；

③DEAE-SepharoseFF离子柱交换柱色谱分离，将步骤②中的冷冻干燥后产物通过DEAE-SepharoseFF离子柱交换柱，0.1～1mol/LNaCL梯度洗脱，洗脱速度1～1.5mL/min，蛋白检测仪280nm进行检测，对各洗脱峰分别进行收集，浓缩后冷冻干燥，将干燥后得到的各个峰组分采用MTT法进行抗肿瘤活性实验，进一步确定目标肽所在的洗脱峰，并对该峰大量收集，浓缩并冷冻干燥；

④采用Sephadex G-25凝胶柱色谱分离，将步骤③所得的具有最高抗肿瘤活性的冷冻干燥后产物过Sephadex G-25凝胶柱，流动相为蒸馏水，流速为1.5～2mL/min，蛋白检测仪280nm进行检测，对各洗脱峰分别进行收集，浓缩后冷冻干燥并用MTT法进行抗肿瘤活性实验；

⑤高效液相色谱纯化，将步骤④中得到的具有最高抗肿瘤活性冷冻干燥后产后过反相高效液相柱，色谱柱为Zorbax SB C₁₈(250mm×9.4mm，5μm)；柱温为室温；流动相为乙腈和水，梯度洗脱：0～20min，乙腈浓从0％变化到95％，洗脱速度2.5～3.0mL/min，紫外检测波长220nm。

3.权利要求2或3所述的贻贝酶解多肽在抗前列腺癌上的应用。

4.权利要求2或3所述的贻贝酶解多肽在抗前列腺癌DU-145细胞抑制增殖上的应用。

5.权利要求2或3所述的贻贝酶解多肽在抗前列腺癌PC-3细胞抑制增殖上的应用。