[发明专利]一种细菌的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是涉及一种细菌的检测方法和一种用于细菌检测的凝集素修饰的金纳米粒子及一种用于细菌检测的试剂盒。

背景技术

当今社会，病毒性感染疾病有愈演愈烈之势，但细菌感染仍然是人类健康的一大威胁。例如结核病造成的死亡仍然位居世界第一位，并且有卷土重来的迹象；食品来源的沙门氏菌、李斯特氏菌和大肠杆菌等是造成腹泻的重要因素；引起肺炎的几种病原如肺炎克雷伯氏菌、肺炎双球菌、肺炎衣原体、肺炎支原体等往往对抵抗力低下、年老或年幼人群构成极大威胁；金黄色葡萄球菌感染十分顽固，而且耐药性十分普遍；脑炎球菌对抵抗力尚不十分完善的儿童威胁较大。随着细菌耐药性的不断增强，生物恐怖主义隐现以及食品污染等影响日常生活，传染病的威胁越来越受到人们的关注，因此发展有效的细菌检测方法对公共卫生有重要意义。

细菌的检测方法多种多样，目前细菌分类鉴定的常规方法主要依赖于细菌培养、染色以及显微观察技术，但是细菌需要进行分离、培养以及一系列的生物化学检测使得该方法非常耗时(Manual of Clinical Microbiology，9th ed.，Am.Soc.Microbiol.：Washington，D.C.，2007)。此外，还有核酸(DNA标记探针、PCR等)技术和抗体检测(ELISA酶联免疫检测、免疫荧光等)技术等，但上述方法属于一对一的检测模式，即一种标记探针只能检测一种细菌。因此，亟待发展高效的细菌识别检测技术。

生物芯片是目前基因组学、蛋白质组学研究的重要工具。生物芯片以其高通量、敏感、准确的特点，越来越多地应用于细菌快速检测以及细菌糖组学的动力学研究(Nat.Chem.Biol.，2006，2，153-157)。但目前，生物芯片主要以荧光为检测手段，在检测灵敏度、选择性等方面尚存在一定的缺点，因而发展生物芯片的检测新方法对其发展有重要意义(Nature，2007，4，437-444)。

发明内容

有鉴于此，本发明目的是针对现有的检测方法灵敏度和选择性欠佳的缺陷，提供一种灵敏度和识别度更高的细菌的检测新方法。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种细菌的检测方法，包括以下步骤：

步骤1：提供对照细菌样品；

步骤2：固定有一种以上凝集素的固体支持物分别与待测样品和对照细菌样品充分作用，洗涤除去固体支持物上未结合的样品；

步骤3：洗涤后的固体支持物与凝集素修饰的金纳米粒子充分作用，洗涤除去固体支持物上未结合的金纳米粒子；

步骤4：检测固体支持物上结合的金纳米粒子的共振光散射信号，与细菌标准品共振光散射信号比较，分析待测样品细菌种类。

细菌表面覆盖着多种不同糖缀合物，如糖蛋白、糖脂、糖胺聚糖和蛋白多糖等，而且不同细菌表面覆盖糖基的种类不完全相同，如大肠杆菌表面覆盖有唾液酸、岩藻糖、末端乙酰氨基半乳糖、α-半乳糖、末端乙酰葡萄糖和α-甘露糖等糖基，而与大肠杆菌不同，枯草芽孢杆菌表面除覆盖有唾液酸、岩藻糖、末端乙酰氨基半乳糖、α-半乳糖、末端乙酰葡萄糖和α-甘露糖等糖基外，还存在葡萄糖-β-1，4葡萄糖低聚物。

凝集素(lectin)是从各种植物、无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，能识别单糖或寡糖中特定的糖基序列，并与之结合，常用于寡糖和糖复合物的分离纯化和糖链的结构分析。目前发现的凝集素有100多种，常用的为植物凝集素(Phytoagglutin，PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A、麦胚素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是它们的总称。一种凝集素可以识别一种或几种特定的糖基序列，并与之结合。如蓖麻凝集素I可以识别半乳糖-β(1，4)葡萄糖(Galβ(1，4)GlcNAcβ1)糖基，大豆凝集素可以特异性识别末端乙酰氨基半乳糖(Terminal GalNAc)糖基，麦胚凝集素可以特异性识别β-乙酰葡萄糖胺、唾液酸和乙酰氨基半乳糖糖基(β-GlcNAc，sialic acid，GalNAc)。