[发明专利]抗人CD52的工程抗体、载体、试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物领域，尤其是一种抗人CD52的工程抗体、载体、试剂盒及其用途。

背景技术

白血病是威胁人类生命健康的主要几种疾病之一，在我国发病率大约为2.76/100000人。其中急性淋巴细胞白血病多见于儿童，急性髓系白血病多见于成年人，而慢性白血病多发于40岁以上人群。它是一类起源于造血(或淋巴)干细胞的恶性疾病。由于干细胞受损，白血病细胞失去进一步分化成熟的能力，或者增殖与分化能力不平衡，而停滞在细胞发育的不同阶段，具体表现为细胞在体内无限增殖，而其分化成熟和凋亡受阻。白血病与其它癌症一样，一直因为没有特应性的标志导致无法用常规药物准确杀伤白血病细胞。白血病细胞与正常细胞的区别目前认为主要在于某些生物分子的表达量不同，利用这些特征，特别是与造血干/祖细胞的区别可以在一定程度上杀伤白血病细胞而不影响造血的重建。特异性识别某种细胞膜表面分子的抗体正是实现这一目的的最好工具，目前利用抗体治疗白血病主要是通过以下三种途径：抗体结合白血病细胞后通过补体依赖的细胞毒和抗体依赖细胞介导的细胞毒直接杀伤白血病细胞；抗体结合白血病细胞表面分子，通过所引发的下游信号诱导白血病细胞分化或凋亡；通过抗体的靶向作用将杀伤性药物或效应物带入白血病细胞内达到局部杀伤的目的等。

人类CD52分子属于一个未命名的短链GPI(Glycosyl-phosphatidylinositol，糖基磷脂酰肌醇)锚定糖蛋白家族。它由一条很短的肽链组成，只有12个氨基酸残基(GQNDTSQTSSPS)，在C末端通过GPI锚定分子连接于细胞膜表面，N末端3位天冬酰胺连接有一个复杂的糖基。CD52分子是一种分布比较广泛的抗原，分布于造血系统的淋巴细胞，单核细胞，嗜酸粒细胞上和单核细胞分化的树突状细胞。在雄性生殖系统中的附睾和输精管上皮细胞也有CD52分子的表达。在很多淋巴系细胞恶性肿瘤和某些急性髓系白血病细胞上也都有CD52分子不同程度的表达。Quigley MM等报道，在92％-100％的毛细胞白血病细胞上都有CD52分子表达。最近有报道，血液中存在从细胞表面脱落的可溶性CD52分子可以作为慢性淋巴细胞白血病的标志。CD52在集落形成细胞上没有显著表达，而在某些被认为是淋巴样祖细胞的CD34+/CD38+细胞上有表达，Hale G等总结了5000多例用抗CD52单抗处理的干细胞移植研究中证明CD52抗原在造血干/祖细胞(CD34+/CD38-)上没有表达。

CD52分子本身的功能目前并不清楚，其很多间接功能都是通过其相应抗体获得的，且都与其自身结构特性有关。作为GPI锚定蛋白，CD52分子被其抗体结合后导致细胞膜重排尽而引发下游信号，对细胞产生影响。另外CD52分子在细胞表面往往呈高度有序排列，并且其分子很小，非常有利于补体的激活。体内应用CD52抗体的实验证明，在体内由CD52抗体介导的靶细胞杀伤主要是通过补体介导的细胞毒作用(CDC)和抗体介导细胞依赖的细胞毒作用(ADCC)实现的。而CD52的高表达和有序排列都利于这些作用在体内的发挥。

最近还有很多证据表明CD52分子对恶性白血病细胞可能是必须的：高度糖基化带来的负电荷具有抗粘附作用，增加了白血病细胞的迁移能力；CD52阴性细胞致瘤率降低而回输体内CD52分子会重新出现；CD52分子在同一个个体中在恶性细胞表面的表达显著高于正常细胞。

以上这些事实均表明CD52分子对于有目的的免疫细胞清除或白血病治疗都是一个良好的靶点，并且对于造血干/祖细胞影响较小，特异性识别CD52分子的抗体具有巨大的潜在药用价值。

目前白血病治疗主要采用控制增殖、诱导凋亡的化疗药物，包括烷化剂、抗代谢药物等。这些药物在杀死白血病细胞的同时，对正常造血细胞也有严重损伤，故对机体存在严重的毒副作用。此外，白血病细胞常会对化疗药物产生耐药，同时化疗后复发率较高，严重影响临床化疗药物治疗的有效性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗人CD52的工程抗体、载体、试剂盒及其用途，并可用于白血病和自身免疫性疾病的诊断、预后判断，清除正常免疫细胞或杀伤白血病细胞；提供的抗人CD52单克隆抗体轻链可变区基因和重链可变区基因及其表达产物，两者重组后表达产生的抗CD52ScFv片段，能够特异性结合人CD52分子并能够降低鼠源性抗人CD52抗体的免疫源性。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种抗人CD52的工程抗体，包括SEQ ID NO.2重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO.4轻链可变区氨基酸序列。