[发明专利]流行性造血器官坏死病毒的PCR检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及病毒的检测方法，特别涉及流行性造血器官坏死病毒(Epizootic hematopoieticnecrosis virus，EHNV)的PCR检测试剂盒及检测方法。

背景技术

近年来，由病毒引起的水产动物病害给水产养殖业造成了重大的经济损失。随着经济的全球化，世界各地水产贸易日益增加，病毒的传播也逐渐蔓延开来，病毒造成的病害已经成为影响世界水产养殖业发展的严重问题(1.Munn CB.Viruses as pathogens of marineorganisms--from bacteria to whales.J Mar Biol Assoc UK，2006，86(3)：453-467)。其中虹彩病毒的危害比较严重，危害分布范围较为广泛，并且鱼类一旦同时感染虹彩病毒和寄生虫，致死率可达90％以上(2.萧枫，张奇亚.水生动物虹彩病毒的分子生物学.水生生物学报，2004，28(2)：202-206)。

流行性造血器官坏死病毒(Epizootic hematopoietic necrosis virus，EHNV)是虹彩病毒科蛙病毒属的成员，能引起河鲈(Perca fluviatilis)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)等多种鱼类的幼鱼和成鱼出现内脏坏死以至死亡(3.World organisation for animal health(OIE).Manual ofDiagnostic Tests for Aquatic Animals 2009.OIE，Paris，France.2009，168-187；4.Langdon JS，Humphrey JD.Epizootic Hematopoietic Necrosis a New Viral Disease in Redfin Perch Percafluviatilis L.in Australia.J.Fish Dis.，1987，10(4)：289-298；5.Langdon JS.Experimentaltransmission and pathogenicity of epizootic haematopoietic necrosis virus(EHNV)in redfin perch，Perca fluviatilis L.，and 11 other teleosts.J.Fish Dis.，1989，12(4)：295-310；6.Reddacliff LA，Whittington RJ.Pathology of epizootic haematopoietic necrosis virus(EHNV)infection in rainbowtrout(Oncorhynchus mykiss Walbaum)and redfin perch(Perca fluviatilis L).J Comp Pathol，1996，115(2)：103-115)。对于EHNV尚无特效药，病毒的早期检测和诊断仍是最重要的防治手段。

目前，常用的诊断方法有电镜观察、ELISA和PCR后酶切等(7.Hyatt AD，Eaton BT，Hengstberger S.Epizootic hematopoietic necrosis virus：detection by ELISA，immunohistochemistry and electron microscopy.J Fish Dis，1991，14，605-617；8.Marsh IB，Whittington RJ，O′Rourke B，Hyattc AD and Chisholm O.Rapid differentiation of Australian，European and American ranaviruses based on variation in major capsid protein gene sequence.MolCell Probes，2002，16(2)：137-151.)，但电镜观察和PCR后酶切均较为繁琐，ELISA难以区分EHNV和蛙病毒属的其他成员，因此急需一种特异性高，简便快捷的针对EHNV的检测手段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性高，简便快捷的流行性造血器官坏死病毒的PCR检测试剂盒。

本发明的另一目的在于提供一种流行性造血器官坏死病毒的检测方法。

本发明所述流行性造血器官坏死病毒的PCR检测试剂盒设有盒体、裂解液、吸附液、洗涤液、PCR反应液、阳性对照和阴性对照。