[发明专利]一种筛选抗HSV-1药物的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用于筛选抗单纯疱疹病毒I型药物的试剂盒，其特征在于：包含独立包装的单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶、碱性缓冲液、MgCl₂和核酸。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶浓度为0.5～0.7mg/ml、碱性缓冲液浓度为40～60mM、MgCl₂浓度为2～4mM、核酸浓度为1.4～1.6μg/ml。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶浓度为0.64mg/ml、碱性缓冲液浓度为50mM、MgCl₂浓度为3mM、核酸浓度为1.516μg/ml。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶是以如下方法得到的：

(1)扩增目的基因：提取单纯疱疹病毒I型病毒基因组作为模板，以SEQ ID NO：1～2所示的核苷酸序列作为引物扩增HSV-1的UL12基因片段，扩增程序为：96℃预变性3min，95℃变性40s，68℃～72℃退火延伸2min30s，31个循环，72℃延伸10min；胶回收扩增的UL12基因片段；

(2)构建重组质粒：将获得的UL12基因片段与表达质粒连接，获得重组表达质粒；

(3)诱导表达：将步骤(2)获得的重组表达质粒转化大肠杆菌；培养含有重组表达质粒的大肠杆菌使其复制至处于对数期；加入异丙基2b-D2硫代半乳糖苷酶诱导表达；离心收集菌体；

(4)变性：破碎步骤(3)获得的菌体，离心收集沉淀，用包含变性剂的洗涤液洗涤沉淀，获得蛋白溶液；

(5)复性：用复性液复性步骤(4)获得的蛋白溶液，获得活性蛋白。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述得到单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶的方法步骤(1)扩增目的基因的方法为：提取单纯疱疹病毒I型病毒基因组作为模板，以SEQ ID NO：1～2所示的核苷酸序列作为引物扩增HSV-1的UL12基因片段，扩增程序为：96℃预变性3min，95℃变性40s，68℃～72℃退火延伸2min30s，31个循环，72℃延伸10min；胶回收扩增的UL12基因片段；将扩增得到的UL12基因片段与T载体连接形成重组T载体，再以该重组T载体为模板，以SEQ ID NO：1～2所示的核苷酸序列作为引物进一步扩增得到核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的UL12目的基因片段，扩增条件不变。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述得到单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶的方法中退火、变性温度为68℃。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述得到单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶的方法步骤(2)中表达质粒为pET系列质粒。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述得到单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶的方法中表达质粒为pET32a-UL12或者pET28a-UL12质粒。

9.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述得到单纯疱疹病毒I型碱性核酸酶的方法步骤(3)中大肠杆菌为E.coli BL12菌株或者为E.coli Rosetta菌株。