[发明专利]一种酵母工程菌、其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种酵母工程菌、其制备方法和应用。 

背景技术

抗菌肽是生物体内在防御外源病原体入侵时产生的小分子多肽，广泛存在于昆虫、植物、动物及人体内，除具有广谱抗细菌、真菌和病毒等病原体作用外，还有抗肿瘤细胞作用和免疫调节作用，在医药卫生、农业生产、食品工业等领域具有广泛的应用前景。抗菌肽作用机制独特，不易产生耐药菌，被认为是传统抗生素替代品。美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05是一种新型的抗菌肽，具有巨大的应用前景。 

但是抗菌肽在体内含量低，分离提纯困难，是制约抗菌肽大规模工业化生产的难题。而且现有的表达系统本身也有不足：抗菌肽自身对病原菌具有抑制和杀灭作用，这就难以用原核生物中的大肠杆菌做为表达系统；使用病毒表达系统存在实验步骤繁琐，条件不易控制等问题；抗菌肽对真核细胞没有抑制作用，但多细胞真核表达系统具有生产周期长，生产成本高的缺点。这些都很难实现大规模的工业生产。 

因此，美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因的表达系统问题，成为影 响美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05应用的一大瓶颈。 

发明内容

有鉴于此，本发明实施例提供一种酵母工程菌，以解决现有技术中美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因不能安全、高效表达的技术问题。 

本发明实施例是这样实现的， 

一种酵母工程菌，该酵母工程菌包含由酵母穿梭质粒和美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因重组构成的重组质粒，美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因序列如SEQ ID NO：1所示。 

以及一种酵母工程菌的制备方法，具体步骤如下： 

扩增美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因； 

将美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因和酵母穿梭质粒重组，得到重组质粒； 

将重组质粒转化至酵母细胞中，恢复培养，得到含有美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因的酵母工程菌，美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因序列如SEQ ID NO：1所示。 

本发明实施例进一步提供上述酵母工程菌在食品、防腐剂、饲料或医药领域的应用。 

本发明实施例的酵母工程菌，使用酵母作为美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因的表达系统，实现了基因安全、高效的表达，适用于工业化生产。 

附图说明

图1是本发明实施例的重组质粒的结构示意图； 

图2是本发明实施例的重组质粒的表达框示意图； 

图3是本发明实施例的酵母工程菌PCR凝胶电泳结果图； 

图4是本发明实施例的美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05进行SDS-PAGE鉴定结果图； 

图5是本发明实施例美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05抑菌试验结果图。 

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。 

一种酵母工程菌，该酵母工程菌包含由酵母穿梭质粒和美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因重组构成的重组质粒，美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因序列如SEQ ID NO：1所示。 

本发明实施例的酵母工程菌中，重组质粒由酵母穿梭质粒和美洲商路抗菌肽Pa-AMP05基因重组而成，该重组质粒在酵母细胞基因组之外，游离于酵母细胞质之中。酵母穿梭质粒是美洲商陆抗菌肽Pa-AMP05基因的表达载体。将酵母工程菌扩大培养，其基因组得到表达，同时本发明实施例的酵母工程菌中的重组质粒也得到表达。 

本发明实施例中的酵母，包括各种酵母，例如毕赤酵母、酿酒酵母，优选的为酿酒酵母，其中酿酒酵母，包括但不限于酒精酵母、汉逊酵母、假丝酵母等，优选的为酿酒酵母S78。酿酒酵母含有符合机体需求的优质蛋白、膳食纤维、复合维生素B和有机铬、锌、硒、铁、钙等元素，其本身即是一种纯天然、无污染、生物态的健康营养源。酿酒酵母是食品级的表达系统，其表达产物安全无毒，使得本发明实施例的酵母工程菌的表达产物中不会掺杂有害物质。同时酵母遗传背景清楚，适用于工业化生产。