[发明专利]抑制肿瘤生长的融合蛋白HGFα-Fc及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质工程领域，具体涉及编码包含HGF片段和Fc片段的融合蛋白及其编码DNA、以及该融合蛋白的制药用途。

背景技术

肿瘤是严重危害人类健康的一类疾病。大量研究已经证实，许多生长因子与肿瘤细胞表面的生长因子受体结合可以诱导肿瘤细胞的恶性增殖。体外细胞模型、动物模型和人体临床试验都表明，阻断该类生长因子与其受体的结合可以有效地抑制肿瘤细胞的生长或诱发肿瘤细胞的死亡，从而达到抑制肿瘤生长的效果。因此，生长因子受体抑制剂是目前抗肿瘤新药的研究热点，目前已经有多个该类生物新药获得了美国FDA的上市批准，同时还有数十种正处于各期临床试验阶段。

肿瘤的生长因子信号通路是一类多种活性生物因子参与的复杂调控过程，其中的一个关键环节是肿瘤细胞表面的受体与多种生长因子相结合从而被激活，然后经细胞内酪氨酸磷酸化信号转导途径控制肿瘤细胞的增殖，从而促进肿瘤的生长。在多种生长因子中，肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor，简称为HGF)是控制肿瘤细胞生长的一种重要因子，其受体肝细胞生长因子受体(Hepatocyte growth factor receptor，简称为HGFR，又被称为C-Met)在多种肿瘤细胞表面过量表达，因此导致此类肿瘤细胞对HGF的敏感性增强。HGF与肿瘤细胞表面的HGFR结合可以引发HGFR二聚化，从而导致HGFR细胞内部分的酪氨酸激酶位点活化，激活下游多种信号通路，最终促进肿瘤细胞的生长。目前许多研究已经证实，HGF依赖的HGFR活化与乳腺癌、肺癌、恶性胶质瘤、骨肉瘤等多种肿瘤的发生密切相关，阻断HGF/HGFR的结合可以有效抑制此类肿瘤的生长，因此，HGF/HGFR是治疗此类恶性肿瘤的一个重要的分子靶点。

HGF是在体内分布广泛的一种生长因子，除主要来源于间质细胞的分泌外，还来自于某些肿瘤细胞(如乳腺癌和恶性胶质瘤)的自分泌。HGF前体是由728个氨基酸组成的单链多肽，成熟HGF是由α链和β链通过二硫键组成的异二聚体。α链由463个氨基酸构成，其N端含有一个PAN结构域，C端含有四个连续的环饼(Kringle domain)结构域。β链由234个氨基酸构成，其中含有一个Peptidase S1结构域。已有研究证实HGF单独的α链依然保留了与HGFR结合的能力，并且可以与天然HGF竞争结合HGFR。由于缺乏β链，HGFα与HGFR的结合并不引发HGFR细胞内部分的酪氨酸磷酸化，因此HGFα片段能够起到阻断HGF/HGFR信号传递的作用，从而达到肿瘤细胞生长的效果。不仅如此，最近还有研究表明，HGFα包含的环饼结构域也能够诱导肿瘤和血管内皮细胞凋亡，这种凋亡是通过抑制EGF、VEGF和bFGF与其受体结合，从而抑制这些受体的磷酸化而发挥作用的。

尽管HGFα能够阻断生长因子类受体信号通路的活化，抑制肿瘤细胞的生长，但是其对肿瘤细胞的杀伤作用仍然不够强大，而且在血浆中的半衰期不理想，因此十分有必要进一步改造以提高其抗肿瘤效应。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服是HGF蛋白片段生物活性和稳定性不好的缺陷。解决该技术问题的技术方案是提供一种优化的包含截断的HGF片段和免疫球蛋白Fc的融合蛋白，其在体内外都具有良好的生物活性和稳定性，能够阻断HGF/HGFR信号传递，并且能够杀伤肿瘤细胞，从而抑制肿瘤的生长。

该抗肿瘤的融合蛋白质由来自人肝细胞生长因子HGF的α链与人免疫球蛋白Fc段构成，人肝细胞生长因子HGF的α链在氮端，人免疫球蛋白Fc段在碳端，HGF的α链和Fc之间由一条连接肽相连。

其中，上述融合蛋白质中所述人肝细胞生长因子HGF的α链包括PAN结构域和四个连续的环饼结构域，PAN结构域在氮端。

其中，上述融合蛋白质中所述人肝细胞生长因子HGF的α链氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中，上述融合蛋白质中所述人免疫球蛋白为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgM或IgA。

其中，上述融合蛋白质中所述人免疫球蛋白为IgG1，IgG1的Fc段的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.4所述。

其中，上述抗融合蛋白质中所述连接肽的氨基酸序列为：GGGGSGGGGSGGGGS。

进一步的，上述融合蛋白质，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.8所示；

或者：

其氨基酸序列为在SEQ ID NO.8的基础上缺失、替换或增加一个或几个氨基酸后所得的具有相同功能的融合蛋白质。

本发明还提供了编码上述的抗肿瘤的融合蛋白质的核苷酸序列。