[发明专利]一种乳酸菌启动子探针载体及其构建方法无效
| 申请号： | 201010253279.6 | 申请日： | 2010-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN101942479A | 公开（公告）日： | 2011-01-12 |
| 发明（设计）人： | 郝彦玲;罗云波;姚璐;张维 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/65;C12N15/66;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加岭;张庆敏 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 乳酸菌 启动子 探针 载体 及其 构建 方法 | ||
1.一种乳酸菌启动子探针载体，其以乳酸菌表达载体为出发载体，插入报告基因，同时删除该表达载体上的启动子获得。
2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述乳酸菌表达载体为pMG36e。
3.如权利要求1或2所述的载体，其特征在于，所述报告基因为gusA。
4.如权利要求2所述的载体，其特征在于，所述表达载体启动子为P32。
5.权利要求1所述探针载体的构建方法，其以乳酸菌表达载体为出发载体，插入报告基因，同时删除该表达载体上的启动子获得。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，以乳酸菌表达载体pMG36e为出发载体，插入β-葡萄糖醛酸酶基因gusA作为报告基因，并删除该表达载体自带启动子P32。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，以植物表达载体pBI121为模板，用下述引物扩增得到gusA：
上游引物gus-F5’-TCATTTGGAGAGAACACGGG-3’
下游引物gus-R5’-CCCAAGCTTAATCATAAAAACCCAT-3’
8.如权利要求7所述的方法，通过酶切位点XbaⅠ和HindⅢ将扩增得到的gusA基因与乳酸菌表达载体pMG36e进行连接，得到质粒pMG36eGUS。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，启动子P32的删除是利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切质粒pMG36eGUS，回收的大片段用Klenow Fragment进行平滑化形成钝端，进一步用T4DNA连接酶连接而实现。
10.权利要求1～4任一项所述的乳酸菌启动子探针载体在筛选乳酸菌启动子中的应用。
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