[发明专利]一种细菌漆酶基因及其表达与应用

权利要求书

1.一种细菌漆酶的基因编码，其特征在于，具有如下核苷酸序列之一：

(1)序列表中的SEQ ID No：1；

(2)序列表中的SEQ ID No：1经取代、缺失或添加一个或几个核苷酸且编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；

(3)编码序列表中SEQ ID No：2蛋白质序列的多核苷酸序列。

2.含有权利要求1基因编码的细菌漆酶，其特征在于，具有下列氨基酸序列之一：

(1)序列表中的SEQ ID No：2；

(2)序列表中的SEQ ID No：2经取代、缺失或添加一个或几个氨基残基且编码相同功能蛋白质的氨基酸序列。

3.含有权利要求1所述的细菌漆酶基因的重组表达载体。

4.含有权利要求1所述细菌漆酶基因的宿主菌。

5.含有权利要求1所述细菌漆酶基因的重组表达载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)以包含细菌漆酶基因的细菌人工染色体载体(Bacterial Artificial Chromosome，BAC)DNA为模板，以P1和P2为引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，所述引物为：

P1：5′-CATATGAACAGGCGAGACTTCCTGG-3′

P2：5′-CTCGAGTGCGACCTCCACCCAGGTCT-3′

(2)将步骤(1)所得PCR扩增产物和pMD18-T质粒连接，得连接产物；将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆，进行序列分析；挑选序列正确的克隆提取质粒，获得含有细菌漆酶基因(lac15)的pMD18-T重组质粒；

(3)用Nde I和Xho I双酶切步骤(2)所得的pMD18-T重组质粒和pET22质粒，然后用T4连接酶将酶切后的lac15与pET22b(+)质粒连接，得到连接产物；连接产物转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，筛选阳性克隆，得到含有本发明lac15基因的工程菌株E.coliBL21(DE3)/lac15。

6.含有权利要求1或2所述基因编码的细菌漆酶蛋白在偶氮染料脱色方面的应用。