[发明专利]油菜茎基溃疡病菌的PCR检测方法及检测用引物

权利要求书

1.一种油菜茎基溃疡病菌的PCR检测方法，其特征在于，包括如下 步骤：

(1)设计引物，该引物的序列为：

Lmb3：5’-caccaattggatccccta-3’(SEQ ID NO.1)；

Lmb4：5’-aggcgagtcccaagtggaaca-3’(SEQ ID NO.2)；

(2)收集菌丝并提取DNA；

(3)采用步骤(1)设计的引物进行PCR检测；所述PCR检测的反应 体系为30μL，包括3μL10×PCR Buffer、3μL dNTP、3μL MgCl₂、步骤

(1)上下游引物各0.5μL、1μL模板DNA、1U Taq聚合酶，加无菌水 补至30μL；所述PCR检测的反应程序为：94℃预变性3min；然后以 94℃30s，56℃30s，72℃40s扩增30个循环；最后72℃延伸5min。

2.如权利要求1所述的油菜茎基溃疡病菌的PCR检测方法，其特征 在于，步骤(2)中，所述收集菌丝并提取DNA具体为：菌株用PDA培 养基繁殖后收集菌丝，液氮研磨后取菌丝粉，用植物基因组提取试剂盒提 取DNA。

3.一种用于检测油菜茎基溃疡病菌的引物，其特征在于，其序列为：

Lmb3：5’-caccaattggatccccta-3’(SEQ ID NO.1)；

Lmb4：5’-aggcgagtcccaagtggaaca-3’(SEQ ID NO.2)。