[发明专利]检测含有筛选基因Hpt的转基因植物及产品的基因芯片及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测含有筛选基因Hpt的转基因植物及产品的基因芯片及其应用，属于生物芯片技术领域。

背景技术

近年来，玉米、大豆、棉花、油菜和番茄等转基因作物已在很多国家获得批准种植和生产，有的被加工成食品、饲料或用做食物添加剂。由于转基因产品的生态安全和食用安全一直备受争议，40多个国家和地区相继实施转基因产品标识制度。

各国转基因标识制度的相继建立，对转基因检测技术的灵敏度和准确性提出了严格的要求，各种转基因检测技术也成为研究热点。常用的转基因检测方法有聚合酶链式反应(PCR)法，外源蛋白检测法，基因芯片检测技术。虽然国外对转基因作物检测方法研究已有十几年，但由于转基因作物的种类多、数量大，一些转基因产品经过深加工、各种条件处理与保存后，转基因成分部分或完全降解，所以检测难度大。因此，需要根据科学技术的发展不断更新检测方法。

但不容乐观的是，设计PCR反应引物是一个棘手的问题，必须确保反应中两条引物有相近的熔接温度，引物之间不会发生相互作用，另外还要注意非特异性扩增，特别是当非特异性扩增带与目的带相近时，就会出现假阳性问题，从而干扰结果的判断。随着GMO检测技术的发展情况及研究趋势，基因芯片技术在此展示了更大的优势。基因芯片检测原理是利用带有荧光标记的样品同探针特异杂交，从而产生阳性信号。因而非目的带的扩增只要不产生阳性信号，就不会干扰，而且芯片检测不依据电泳条带。并且基因芯片可根据任何已知基因组序列设计特异性探针，以人工合成的方法快速制备芯片，且高度并行性、高通量、微型化、自动化、高准确度和灵敏度等优点具有广泛的应用前景。

经对现有专利和其他文献的检索，尚未发现关于Hpt基因的基因芯片检测技术的专利报道。

发明内容

针对上述现有技术的不足和实际检测的需要，本发明提供了一种特异性检测含筛选基因Hpt的转基因植物及其产品的基因芯片及其应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种检测含筛选基因Hpt的转基因植物及其产品的基因芯片，包括表面醛基化修饰的载玻片和阵列涂布于其上的筛选基因Hpt探针以及核酸固定的阳性对照(HEX)、杂交阳性对照(PC)、阳性质控探针(18S rRNA)、阴性质控探针和空白对照；

其中，所述阳性对照和杂交阳性对照为北京博奥生物技术有限公司提供的晶核酸固定阳性对照(HEX)(产品号为：502000)和晶杂交阳性对照(PC)(产品号为：503000)；

所述阳性质控探针为18S rRNA，其探针序列为：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-ATGGTGGTGACGGGTGACGGAGAATTAGGGTTCGATTCCG；

所述阴性质控探针为SHDC-人类表达特异蛋白基因，其探针序列为：

NH₂-(CH₂)₆-O-Poly(dT)15-ATTGCCAGAAGACATCCTTACTTTTATGCCCCGGAACTCC，

所述阳性质控探针和阴性质控探针序列均来源于许小丹，文思远等(检测及鉴定转基因大豆寡核苷酸芯片的制备.农业生物技术学报，2005，13(4)：429-434)的报道；

所述空白对照为点样液-双蒸水；

所述的筛选基因Hpt探针序列为：

NH2-(CH2)6-O-Poly(dT)15-ATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGC。

上述检测转基因植物及其产品筛选基因Hpt的基因芯片，还包括探针对照，探针对照选自转基因玉米Bt176转化体特异性探针、转基因玉米Bt11转化体特异性探针、转基因玉米TC1507转化体特异性探针、转基因玉米Mon810转化体特异性探针、转基因玉米GA21转化体特异性探针。

转基因玉米GA21、Bt11、Mon810、TC1507和Bt176的转化体特异性探针均来源于路兴波，武海斌等(转基因玉米转化体特异性寡核苷酸芯片检测方法的研制.作物学报，2009，35(8)：1432-1438)的报道。

所述芯片的阵列布局为人为规定，可以任意布局，本发明所用的布局如图1所示。

所述的阳性对照、杂交阳性对照、阳性质控探针、阴性质控探针、空白对照、筛选基因Hpt探针的点样浓度为25μmol/L。探针对照的点样浓度为25μmol/L。