[发明专利]松针红斑病PCR检测方法无效
| 申请号： | 201010032443.0 | 申请日： | 2010-01-08 |
| 公开（公告）号： | CN102121050A | 公开（公告）日： | 2011-07-13 |
| 发明（设计）人： | 王占斌;王志英;严善春 | 申请（专利权）人： | 东北林业大学;王占斌;王志英;严善春 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 哈尔滨东方专利事务所 23118 | 代理人： | 陈晓光 |
| 地址： | 150040 黑龙江省哈尔*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 松针 红斑 pcr 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种松针红斑病PCR检测方法，其特征是：该方法包括如下步骤：取1μL松针红斑病DNA溶液，加入反应液Taq聚合酶1μL、10×PCR Buffer5μL、dNTP 4μL、上游引物1μL、下游引物1μL、无菌去离子水36.25μL进行PCR扩增反应；然后取8μLPCR扩增产物，在1.0％琼脂糖凝胶上进行电泳，电压50-100V，30分钟后在紫外光下检测结果：存在分子量约为180bp的DNA条带，则证明所检病原为松针红斑病病原菌。
2.根据权利要求1所述的松针红斑病PCR检测方法，其特征是：所述的Taq聚合酶的浓度为5U/μL，所述的10×PCR Buffer中Tris-HCL为100mM，KCL为500mM，MgCL2为15mM，dNTP为2.5mM，上游引物为20μM，下游引物为20μM，所述的上游引物序列为5’CGACCTCCAACCCTT 3’，所述的下游引物序列为5’CGCTGCGTTCTTCAT 3’。
3.根据权利要求1所述的松针红斑病PCR检测方法，其特征是：所述的PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min；54℃退火1min；72℃延伸1min；29个循环，最后72℃延伸7min。
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