[发明专利]一种现场快速定性定量检测铜绿微囊藻的方法

权利要求书

1.一种现场快速定性定量检测铜绿微囊藻用试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括碱基序列如下的核酸探针：

5’-AGCCAATTTCGCCTCGCTCC-3’；

该核酸探针的5’端添加有异硫氰酸荧光素标记。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括下列试剂：

(1)固定液：

所述固定液是将多聚甲醛溶于pH7.5的磷酸缓冲液得到，其中多聚甲醛的浓度是每100ml的固定液中含有4g多聚甲醛；

(2)清洗液：1倍的SSC缓冲液；

(3)杂交缓冲液：每100ml杂交缓冲液由20ml20倍的SSC缓冲液、40ml甲酰胺和40ml双蒸水组成。

3.一种现场快速定性定量检测铜绿微囊藻的检测方法，其特征在于：采用下列试剂盒按照检测方法进行检测：

A、试剂盒

(1)核酸探针：

5’-AGCCAATTTCGCCTCGCTCC-3’；

该核酸探针的5’端添加有异硫氰酸荧光素标记；

(2)固定液：

所述固定液是将多聚甲醛溶于pH7.5的磷酸缓冲液得到，其中多聚甲醛的浓度是每100ml的固定液中含有4g的多聚甲醛；

(3)清洗液：1倍的SSC缓冲液；

(4)杂交缓冲液：每100ml杂交缓冲液由20ml20倍的SSC缓冲液、40ml甲酰胺和40ml双蒸水组成；

B、检测方法

第一步：固定藻细胞

将收集的铜绿微囊藻藻细胞液体采用离心分离的方法得到铜绿微囊藻藻细胞，于冰上用所述固定液将所述铜绿微囊藻藻细胞在培养皿固定完全后，吸去固定液；

第二步：脱水

向固定于培养皿中的铜绿微囊藻藻细胞滴加乙醇溶液，然后吸去乙醇溶液使铜绿微囊藻藻细胞脱水，共进行两次，依次用体积浓度80％乙醇溶液和体积浓度90％的乙醇溶液；

第二步：杂交

向脱水后的铜绿微囊藻藻细胞滴加所述杂交缓冲液，使藻细胞适应杂交环境，然后吸去杂交缓冲液加入所述杂交缓冲液和核酸探针的混合液，于避光条件下进行杂交，所述杂交缓冲液和核酸探针的混合液中核酸探针的浓度为0.5μmol/L；

第三步：冲洗

用所述清洗液在40℃条件下洗涤，将未反应的核酸探针去除；

第四步：荧光显微镜下观察

在荧光显微镜下观察到绿色荧光时，证明有铜绿微囊藻存在。