[发明专利]鉴别香菇菌种241和241-4的分子特异性标记引物及检测方法

权利要求书

1.一种鉴别香菇生产菌种241和241-4的分子特异性标记引物，所述引物 序列为：

上游引物：5′-GGTTCTGCTCCTTGTGACTG-3′

下游引物：5′-TCTGCTCTTCAGATGCAAGCT-3′。

2.一种利用权利要求1所述分子特异性标记引物对香菇生产菌种241和 241-4进行快速鉴别的方法，所述方法包括：提取待测香菇菌种基因组 DNA作为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR 扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现1609bp的DNA条 带，则待测菌种为香菇241菌种，若电泳结果未出现1609bp的DNA 条带，则待测菌种为香菇241-4菌种；所述分子特异性标记引物序列为：

上游引物5′-GGTTCTGCTCCTTGTGACTG-3′

下游引物5′-TCTGCTCTTCAGATGCAAGCT-3′。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述PCR扩增反应体系组成如下：

余量为ddH₂O；

PCR反应条件如下：

94℃预变性6min后；92℃变性40s，60℃退火40s，72℃延伸2min， 共30个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为4℃。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)取待测香菇菌种，接种至PDA斜面培养基，25℃培养14d，转接 至PD液体培养基中，25℃下振荡培养14d，收集菌丝，以 SDS-CTAB法提取待测香菇菌种基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，以所述分子特异性标记 引物作为扩增引物，进行PCR扩增：

PCR反应体系每20μL组成如下：

ddH₂O补足至20μL；

PCR反应条件如下：

94℃预变性6min后；92℃变性40s，60℃退火40s，72℃延伸2min， 共30个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为4℃；

(3)取步骤(2)扩增产物5μL，与1μL 0.25％溴酚兰缓冲液混匀， 点样于1.5％的琼脂糖凝胶上，于1×TAE缓冲液中、5V/cm电压 下电泳，电泳结束后EB染色，于自动凝胶图像分析仪上照相， 若电泳结果出现1609bp的DNA条带，则待测菌种为香菇241菌 种，若电泳结果未出现1609bp的DNA条带，则待测菌种为香菇 241-4菌种。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述EB染色为在含0.5μg/ml EB 的水溶液中染色30分钟。