[发明专利]甲胎蛋白及其编码基因的新用途

说明书

技术领域

本发明涉及甲胎蛋白及其编码基因的新用途。

背景技术

肝细胞癌是高发病率的肿瘤，严重威胁人类健康。肝癌细胞耐受化学药物是造成肝癌细胞复发、转移和难治的主要原因。肝癌细胞耐受化学药物诱导凋亡的分子机制至今还不清楚。

RA是维生素A的衍生物，它通过与细胞内的受体RAR(α、β、γ)和RXR(α、β、γ)结合调控相关基因表达而发挥调节细胞分化和诱导细胞凋亡的作用。因RA能有效的诱导肿瘤细胞凋亡而且毒性小，所以在在临床上已开始将其应用于肺癌、乳腺癌和肝癌等实体肿瘤的治疗，早前该RA已被广泛应用于白血病治疗；但肝癌细胞明显耐受药理剂量的RA作用，使用RA治疗肝肿瘤效果并不理想。肝细胞癌耐受RA是限制使用RA治疗肝癌的重要因素，因而探索肝癌细胞耐受RA的分子机制是合理使用RA治疗肝肿瘤的理论基础。

甲胎蛋白(AFP)是肝癌细胞发生发展过程高表达的特异性很高的蛋白质。有关研究表明AFP能通过受体介导促进癌基因(如c-ras等基因)的表达，导致肝癌细胞增殖；AFP也能通过抑制肝癌细胞表达TRAIL受体，减少肿瘤细胞与淋巴细胞分泌的TRAIL结合，从而导致肝癌细胞逃避淋巴细胞的免疫监视；AFP能与细胞内的蛋白质结合，通过影响细胞内的信息传递和热休克蛋白的功能调节细胞的生长。AFP结构复杂，其3个结构域与相应的配体蛋白结合会产生不同的生物学效应。已经有人推测AFP具有能与胞内类固醇/甲状腺素类家族受体结合的结构域基础，但是AFP是否能和这些蛋白质结合还没有得到研究验证，而且AFP对胞内受体的生物学功能有没有影响，也是需要探索的科学问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供甲胎蛋白及其编码基因的新用途。

本发明所提供的甲胎蛋白及其编码基因的一种新用途是甲胎蛋白及其编码基因在设计和/或筛选药物中的应用。

本发明所提供的甲胎蛋白及其编码基因的另一种新用途是以甲胎蛋白及其编码基因为靶点的物质在制备药物中的应用。

其中，所述药物可为用于预防和/或治疗肝癌的药物。

所述以甲胎蛋白及其编码基因为靶点的物质可具体为蛋白质或者核酸。

本发明的另一个目的是提供一种以甲胎蛋白及其编码基因为靶点的用于预防和/或治疗肝癌的药物。

所述药物的活性成分可具体为核酸。

上述核酸可为抑制所述甲胎蛋白编码基因表达的小干扰RNA、表达所述小干扰RNA的载体、表达抑制所述甲胎蛋白编码基因表达的shRNA的载体、与所述甲胎蛋白编码基因发生同源重组且抑制所述甲胎蛋白编码基因表达的同源序列或含有所述同源序列的载体。

所述shRNA由茎I、环和茎II构成的茎环结构；所述茎I的序列具体可为GAACGUGG UCAA UGUA UAAU，所述茎II的序列具体可为AUUAU ACAU UGAC CACG UUC，环结构是UCAAGAG。

本发明的药物能够通过抑制肝癌细胞内AFP蛋白的表达，从而减少AFP与RA的受体RAR-β的结合，使更多的RAR-β进入细胞核中，与survivin的启动子结合从而抑制survivin的表达，进而抑制肝癌细胞的增殖。试验证明，对于没有用本发明药物处理过的肝癌细胞，要用80μM或更高剂量的ATRA才能抑制肝癌细胞的增殖，而用本发明药物处理过的肝癌细胞，只要用40μM的ATRA就能抑制肝癌细胞的增殖，因此，本发明的药物降低了肝癌细胞对RA的耐受性，在治疗肝癌领域有重要的应用价值。

附图说明

图1为AFP或ATRA对Bel 7402生长的调节作用。

图2为AFP对ATRA诱导Bel 7402凋亡的拮抗作用。

图3为AFP与RAR-β在胞浆里的相互结合检测。

图4为荧光能量共振转移技术(FRET)分析AFP与RAR-β的相互作用。

图5为出发载体的图谱及转染效率。

图6为siRNA干扰载体对Bel 7402细胞中AFP和survivin表达的影响。

图7为siRNA干扰载体对Bel 7402细胞凋亡的影响。

图8为siRNA干扰AFP表达后，对RAR-β对Bel 7402细胞survivin基因启动子相互作用的影响。

图9为编码shRNA的DNA的设计。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。