[发明专利]一种抗寄生虫的化合物及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及生物科学，具体说就是一种抗寄生虫的化合物及其制备方法。

(二)背景技术

放线菌是自然界分布最广泛的微生物类群之一，而链霉菌(Streptomyces)是放线菌中最大的一个类群，也是抗生素的重要产生菌。目前，包括出现在专利中的种已经超过3000个，至1996年有效描述的种有464个和亚种45个。据统计，链霉菌产生的抗生素占抗生素的70％左右。占放线菌产生抗生素的90％以上。而目前我国发现的农用抗生素，无论是大面积应用还是局部地区商品化产品，或是有较大应用潜力的农用抗生素产生菌均为链霉菌。尼莫克汀(Nemadectin)(图一)由蓝灰链霉菌Streptomyces cyaneogriseussp.noncyanogenus发酵产生，是十六元大环内酯化合物，属于米尔贝霉素族(Milbemycin)抗生素。以尼莫克汀为基础半化学合成的莫西克汀(Moxidectin)(图二)在C-23位引入＝N-OCH₃基团，亲脂性更强。莫西克汀同伊维菌素(Ivermectin)的作用机制基本相似，但比伊维菌素具有更高的活性。莫西克汀可用于抗多种体内外寄生虫，其中内寄生虫主要是线虫，外寄生虫有螨、蜱和蚤类。它抗寄生虫的特点是：作用强烈，用药量少，并且对人安全、无毒害、不污染环境，只杀害虫，不杀害虫天敌，也不易产生抗药性，可以作为防治该类药物产生抗性的复配及轮换用药，是目前最有前途的广谱、高效、新型、抗虫、无交叉感染的生物杀虫剂，被誉为当今活性最高的杀虫剂之一，是目前最有前途的抗虫抗生素。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种高活性、药效持久的抗寄生虫的化合物及其制备方法。

本发明的目的是这样实现的：所述的抗寄生虫的化合物，分子式为：C₃₆H₅₀O₇；

结构式为：

所述的抗寄生虫的化合物的制备方法，步骤如下：

步骤一：培养基的制备：平板及斜面培养：培养基的组成(g/L)：葡萄糖10，麦芽糖3，酵母抽提粉3，K₂HPO₄·3H₂O 0.5，MgSO₄·7H₂O0.5，NaCl 0.5，KNO₃ 1，微量元素溶液5，pH 7.0～7.2，使用去离子水配制，微量元素溶液(g/L)：MgSO₄·7H₂O 80，CaCO₃ 10，FeCl₃ 6，ZnSO₄ 2，MnSO₄ 2，CuSO₄ 0.5，CoCl₂ 0.4，用去离子水定容，置于28℃的培养箱中，相对湿度40～60％，培养9d；

步骤二：种子培养：种子培养基组成(g/L)：葡萄糖5，麦芽糊精20，可溶性淀粉1，酵母膏10，牛肉膏1，酪蛋白胨1，pH 7.0～7.2，使用自来水配制；将成熟斜面上的孢子用灭菌后的接种铲挖块接种于种子培养摇瓶中(挖块大小约1×0.5cm)，种子摇瓶装液量25ml/250ml，于28℃，250rpm旋转式摇床上培养48h；

步骤三：摇瓶发酵：发酵培养基组成(g/L)：葡萄糖10，乳糖25，棉籽饼粉25，CaCO₃ 3；pH 7.0～7.2，使用自来水配制；将种子液按8％的移种量接入发酵摇瓶中，发酵摇瓶装液量为25ml/250ml三角烧瓶，于28℃，250rpm旋转式摇床上培养9d；

步骤四：分离和提纯化合物：发酵液经100～200目筛网过滤后，滤渣用甲醇提取，提取液浓缩至一定体积后用EtOAc萃取，将萃取夜浓缩后依次进行硅胶柱层析，RP-18柱层析所得到的化合物，得到无色的粉末状化合物。

步骤五：硅胶层析：其所用到的填料是200-300目的硅胶，流动相为石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1-5∶5(V/V)两种洗脱液混合进行梯度洗脱。其中RP-18柱层析使用混合溶剂，甲醇与水＝80∶20-95∶5(V/V)的溶液进行梯度洗脱的。