[发明专利]一种用ACCα基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法

说明书

(一)技术领域

本发明属于动物分子遗传学领域，特别涉及一种采用分子标记检测鸡腹脂量的方法。

(二)背景技术

肉鸡经过各国育种者多年的选育，其生产性能有了显著提高。在肉鸡早期生长速度得 以明显提高的同时，肉鸡自身生理适应能力等方面也出现了一系列亟待解决的问题。快大 型肉鸡体脂(尤其是腹脂)蓄积过多已成为一个特别突出的问题。肉仔鸡体内沉积过多的 脂肪有诸多不利：(1)明显降低饲料转化效率，因为沉积单位重量的脂肪组织比沉积单位 重量的瘦肉多消耗三倍的能量；(2)降低了胴体瘦肉对脂肪组织的比例，因而降低了分割 肉产量；(3)加工者和消费者将肉仔鸡体内沉积的这些脂肪的很大一部分(腹脂垫、肌胃 周围脂肪、嗉囔脂肪及肠系膜脂肪等)丢弃，这不仅增加了加工者和消费者的负担，而且 增加了废物及处理水中的脂肪含量，从而污染环境。由此看来，肉仔鸡体内沉积过多的脂 肪将会给生产者、加工者和消费者造成显而易见的经济损失。同时肉种鸡过肥也将会严重 影响产蛋率、受精率和孵化率，并且会诱导脂肪肝综合症的发生，从而加大了产蛋期的死 淘率。因此，控制脂肪在鸡体内的过多蓄积，进一步提高肉鸡的饲料转化效率和胴体质量 是我国急需研究解决的重大问题。

乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase，ACC)属于分子间羧化转移家族成员。 乙酰辅酶A羧化酶有两种同型物：乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)和乙酰辅酶A羧化酶 β(ACCβ)。ACC可以催化乙酰辅酶A生成丙二酸单酰辅酶A，是脂肪合成的限速调节酶。 丙二酸单酰辅酶A作为长链脂肪酸合成的前体，在脂肪酸的合成中作为2碳单位的供体，并且 在脂肪酸的氧化中作为线粒体穿梭系统的调节因子，同时还可以作为一种信号分子通过调 节下丘脑来对摄食和能量平衡进行调控。

在哺乳动物中，对两种类型的ACC基因的功能已经有了较为深入地研究。ACCα与 ACCβ分别位于胞质和线粒体膜上，由他们催化产生的丙二酸单酰辅酶A位于两个相对独 立的区域，不会混合。位于胞质中的丙二酸单酰辅酶A用于进行脂肪酸的从头合成，而位 于线粒体附近的丙二酸单酰辅酶A则调节肉毒碱棕榈酰转移酶I的活性，从而调控对脂肪 酸的氧化(Abu-Elheiga，2005)。因此，脂肪酸的合成与氧化过程不是同时发生的。在鸟 类和哺乳动物的脂肪合成组织中，ACCα基因的转录水平受营养和激素双重调节。处于饥饿 状态的鸡其肝脏中ACCα的转录水平是很低的，而当饲喂高碳水化合物、低脂肪的饲料时 ACCα基因的转录水平能够提高11倍(Hillgartner等，1996)。体外培养原代鸡胚肝细胞 时，加入激活型T3(三碘甲腺原氨酸)，能够使ACCα基因的转录效率提高5-7倍(Zhang 等，2001)。Mooney等(2008)在研究山羊豆碱为什么会导致小鼠体重减少时发现，其主 要途径为山羊豆碱能抑制ACC的活性，ACCα与ACCβ的活性降低能使脂肪合成减少，同 时脂肪酸氧化加快，从而影响小鼠的体重性状。Liang等人(2006)的研究表明，ACCα在 脂肪代谢中具有重要的作用，ACCα功能异常可以导致肥胖、II型糖尿病等疾病，将ACCα 作为药物的靶基因治疗肥胖等相关疾病有着重要意义。Abu-Elheiga等(2005)指出敲除大 鼠ACCα基因后，大鼠产生胚胎致死现象，可以看出ACCα对胚胎的早期发育非常重要。

Takai等人(1987)在鸡的肝脏组织中分离出ACCα。ACCα基因位于鸡19号染色体，CDS 全长6974bp，DNA序列由50个外显子和49个内含子组成，全长92409bp，编码2324个氨基酸。 鸡、小鼠、人的ACCα的氨基酸序列非常相似，其同源性约为90％。在哺乳动物中，ACCα基因 主要在肝脏和脂肪组织中表达。本课题组的研究表明ACCα基因在鸡腹脂、肝脏、脾脏、腺胃、 肌胃中均有表达。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种分子生物学技术，即采用PCR-RFLP的方法检测鸡ACCα 基因外显子19中G→A变异位点，操作简单、费用低、精确度高，可进行快速检测的一种 用ACCα基因预示和鉴定鸡腹脂量的分子标记方法。

本发明的目的是这样实现的：

1、根据鸡ACCα基因序列设计一对引物G2292AF和G2292AR，其中下游引物3’端最 后一个碱基G为人为设计碱基(不与基因组序列配对)，目的是为了在突变碱基附近产生一 个强制性酶切位点：