[发明专利]细菌、细胞药敏检验方法及药敏检验装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种细菌、细胞药敏检验方法及药敏检验装置。

背景技术

药敏检验是对细菌或细胞耐药性进行检测的重要试验。现有的药敏检验方法，其用的培养基一般分为液体培养基和固体培养基两种，其检验方法一般有纸片检验法和浓度检验法，纸片检验法采用的是固体培养基，浓度检验法采用的是液体培养基。纸片检验法是通过观察由于贴在固体培养基表面上药物纸片形成的药物抑菌圈来确定结核杆菌对药物的敏感性；浓度检验法是通过观察检测不同药物和不同药物浓度试验容器中细菌或细胞的生长情况来确定细菌或细胞对药物的敏感性。不管是纸片检验法还是浓度检验法，其整个药敏检验过程一般可分为浓集细菌或细胞、增殖或分离培养和药敏检验三个阶段。例如利用现有的技术对结核杆菌进行药敏试验，一般有纸片检验法和浓度检验法，其整个检验过程一般都可以分为浓集结核杆菌、增殖或分离培养和药敏检验三个阶段。现有的纸片检验法，浓集结核杆菌阶段的步骤为：①用吸管吸取患者提供的标本置于试验容器中；②向试验容器中加入消化液，对标本粘液进行消化，使标本中粘液和杂质中包裹的细菌充分暴露；③离心分离，倒掉上清液，获得结核杆菌标本。在获得结核杆菌标本后再进行增殖或分离培养培养。增殖或分离培养培养阶段的步骤为：④取已经浓集的结核杆菌标本少部分制成浓菌液；⑤将浓菌液接种于固体培养基例如罗氏培养基上进行增殖或分离培养培养，一般需在37℃培养箱中培养1月左右，把单个细菌培养成细菌菌落；在获得细菌菌落后再进入药敏检验阶段。药敏检验阶段的步骤为：⑥取少量的细菌菌落，一般是取1——3个细菌菌落，将其溶解分散成浓菌液；⑦将浓菌液接种于固体培养基例如琼脂培养基表面上；⑧在固体培养基表面上贴上药物纸片；⑨放入37℃培养箱中培养1个月左右，观察药物抑菌圈，确定结核杆菌对药物的敏感性。现有的纸片检验法的优点是操作方便、设备简单，投资小；但其存在以下缺点：(1)整个检验所需的时间太长。增殖或分离培养培养阶段需要1个月左右，药敏检验阶段大约需要1个月左右，整个检验过程大约需要2个月左右。如果在药敏检验得到结果后再使用药物治疗，就会严重影响治疗时机。而临床上在没有药敏检验的情况下使用药物治疗往往会造结核杆菌耐药的严重后果。(2)不安全。整个检验需要两次人工接种，由于结核杆菌具有传染性，这样对操作人员形成安全隐患，对环境形成污染隐患。

现有的浓度检验法，有两种方法，一种浓度检验法是在增殖培养阶段采用固体培养基，其浓集结核杆菌和增殖或分离培养培养二个阶段的步骤与现有的纸片检验法相同，但药敏检验阶段的步骤与现有的纸片检验法不同，具体为：从固体培养基上取增殖或分离培养培养获得的细菌菌落，一般是取1或数个细菌菌落，→→将其溶解分散成菌悬液→→将菌悬液倒入按不同的药物和不同的浓度配制成的多个试验容器中，制成对比试验标本→→观察检测试验容器中细菌生长情况，确定结核杆菌对药物的敏感性。这种检验方法的优点是设备简单，投资小；但其存在以下缺点：(1)所需的时间长。增殖或分离培养培养阶段的方法和步骤与现有的纸片检验法的方法和步骤相同，因此，仅增殖或分离培养培养阶段所需的时间就需要1个月左右；(2)操作麻烦、不安全且容易造成错误的检验结果。由于需要配制多个试验容器，配制过程很麻烦且不安全，对操作人员形成安全隐患，对环境形成污染隐患；在配制多个试验容器过程中比较容易被其他细菌污染，这样就可能造成错误的检验结果。另一种浓度检验法是在增殖或分离培养培养阶段采用液体培养基。这种检验方法一般采用专用仪器检验，例如BD公司推出的BACTEC 9000MB及BACTEC MGIT 960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏系统，其优点是操作简单，检验过程时间短，平均检出时间为14.4天，最快10天左右。但其存在的主要缺点是仪器设备的价位高，投资大；使用成本高，一是仪器设备的使用成本高，二是需要多个对比试验标本，试剂的成本较高，其费用较大，一般医院难以承受，难以推广普及。

对体外细胞进行药敏试验的方法较多，常用的方法有MTT比色法、放射线同位素掺入法等，但其都存在操作麻烦、容易造成错误的检验结果等缺点。原因是需要配制不同药物和不同浓度的多个试验容器，并且要向每个试验容器中加细胞悬液，配制和加细胞悬液的过程很麻烦，在配制多个试验容器过程中比较容易被污染，这样就可能造成错误的检验结果。

从上面详细分析结核杆菌药敏检验中可以看出，现有的细菌、细胞药敏检验方法尤其是结核杆菌检验方法存在以下缺点：(1)整个检验过程所需的时间长。(2)操作麻烦。(3)不安全。(4)容易出现误检。(5)投资大，难以推广普及。

发明内容