[发明专利]使用超声诱导的报道分子构建体转染的体内表达分析

说明书

发明领域

本发明涉及用于在哺乳动物中的表达分析的组合物。本发明在生物 学和化学领域中，更特别地在诊断学领域中。本发明特别涉及体内表达 分析。

发明背景

基因调节的研究是生物科学的急速增长的学科。很长时间以来已了 解基因(编码和非编码)转录成RNAs在大多数情况下受紧在编码区5’ (或“上游”)的非编码调节区控制。DNA的这些非编码序列包含决定其 中基因在生物的寿命过程中表达的条件(何时、何地和在何种外部刺激 下)的序列模式。这些非编码序列由转录因子(其依赖于其功能通常称 为增强子或阻遏物)结合，所述转录因子随后募集后生调节物和其它蛋 白，它们形成较大复合物且对靶转录物的表达施加控制。理解基因调节 的机制是理解疾病进展以及来自对最复杂的生物过程最基础的一切的 基础。

经过数年，已设计了许多方法以研究在调节和表达水平上的基因表 达。在个体水平上，基因表达通常使用称为逆转录酶聚合酶链反应 (RT-PCR)的技术非常可靠地进行测量。为了平行测定数千种基因的 表达分析，已采用诸如微阵列、基因表达系列分析(SAGE)和大量平 行标记测序(MPSS)的技术。为了推断基因表达的模式，已开发了许 多方法以统计分析。

缺点是所有这些方法要求包含目的RNAs的组织或细胞的物理分离 和破坏。这使得基因表达的研究变得昂贵和劳力密集。研究随时间的基 因表达是特别复杂的，因为需要获得许多样品且使样品中的所有细胞的 基因表达同步。最重要的是当样品用各种试剂进行处理时，不能避免使 细胞“休克”，这使表达模式不正常。因此将希望手中具有体内表达分析 系统。然而，以无侧面介导的表达发生的方式将表达系统带进器官或甚 至组织内也是问题，这必须应对以直接和有效方式转染所述载体的问 题。

因此，还需要关于与此种表达分析系统组合的实际和有效的载体送 递方法。通过常规注射针方法的载体注射的主要问题是载体材料必须大 量注入靶位点内，这是由于将载体材料扩散到细胞的核内的尝试的无效 率和酶系统立即移动以破坏注入的载体核酸分子的问题。例如，使用注 射针的治疗注射技术已相对缓慢地进展。

例如，阳离子脂质体已广泛用于体内基因转移到内皮细胞内 (Brigham，K.B.等人(1989)Am.J.Med.Sci.298，278-281；Hofland， H.E.J.等人(1997)，Pharm.Res.14，742-749；Liu，F.等人(1997)， Gene Therapy 4，517-523；Mahato，R.I.等人(1998)，Hum.Gene.Ther. 9，2083-2099；Rolland，A.P.(1998)，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 15，143-198)。由于缺乏靶细胞特异性和低体内基 因转移效率，目前基于阳离子脂质体的系统用于靶向肿瘤内皮的用途是 有限的(Lesoon-Wood，L.A.等人(1995)，Hum.Gene.Ther.6，395-405； Anwer等人(Human gene Therapy，提交的))。

已提出通过共价缀合单克隆抗体或其它靶向部分(例如，特异性肽 和脂质)修饰脂质体表面，以改善肿瘤特异性基因送递(Boulikas，T. (1996)，Int.J.Oncol.9，941-954；Kong，H.L.和Crystal，R.G.(1998)， J.Natl.Cancer Inst.90，273-286；Pietersz，G.A.和McKenzie，I.F.C.(1992)， Immunol.Rev.129，57-80；Thorpe，P.E.和Derbyshire，E.J.(1997)， J.Cont.Release 48，277-288；Kircheis，R.等人(1997)，Gene Therapy 4，409-418)。

机械法例如电穿孔和喷射注射已描述为增强靶组织中的基因转移 的有用外部方法(Gallo，S.A.等人(1997)，Biophys.J.72，2805-2811)。