[发明专利]使用超声诱导的报道分子构建体转染的体内表达分析

权利要求书

1.用于表达分析的组合物，其包含，

a.微泡，

b.哺乳动物表达载体系统，其包含，

i.处于将确保在体内的组成型表达的启动子控制下的第一荧光报 道基因，

ii处于非组成型表达的启动子控制下的第二荧光报道基因，

iii.哺乳动物复制起点，

iv.细菌复制起点，

v.所述第一荧光报道基因的启动子，和

vi.可激活且遍在表达的所述第二荧光报道基因的启动子。

2.根据权利要求1的组合物，其中所述哺乳动物载体系统包含一种 或多种另外的荧光报道基因，其处于非组成型表达的启动子控制下。

3.根据权利要求1或2的组合物，其中

i.所述第一荧光报道基因选自编码绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、 青色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、去稳定的绿色荧光蛋白 的基因，

ii.所述第二或另外的荧光报道基因选自编码绿色荧光蛋白、蓝色 荧光蛋白、青色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、去稳定的绿 色荧光蛋白的基因，

iii.所述第一荧光报道基因的启动子选自巨细胞病毒启动子 (CMV)、CMV-IE、编码转录启动子LTR的HIV-1长末端重复序列 (LTR)、SV40 IE、HSV tk、β-肌动蛋白、人珠蛋白α、人珠蛋白β和 人珠蛋白γ启动子，和

iv.所述微泡介质包含选自游离气泡、稳定化的气泡、胶体悬浮液、 乳状液和水溶液的介质。

4.根据权利要求3的组合物，其中所述微泡介质是包含十二氟代戊 烷的胶体悬浮液。

5.根据权利要求3的组合物，其中所述微泡介质是包含超声处理的 白蛋白的水溶液。

6.根据权利要求3-5的组合物，其中

a.所述绿色荧光蛋白选自EGFG、AcGFP、TurboGFP、Emerald、 Azani Green和ZsGreen，

b.所述蓝色荧光蛋白选自EBFP、Sapphire和T-Sapphire，

c.所述青色荧光蛋白选自ECFP、mCFP、Cerulean、CyPet、AmCyan1、 Midori-Ishi Cyan和mTFP1(Teal)，

d.所述黄色荧光蛋白选自EYFP、Topaz、Venus、mCitrine、Ypet、 PhiYFP、ZsYellow1和mBanana，

e.所述橙色和红色荧光蛋白选自Kusabira Orange、mOrange、 dTomato、dTomato-Tandem、DsRed、DsRed2、DsRed-Express(T1)、 DSRed-Monomer、mTangerine、mStrawberry、AsRed2、mRFP1、Jred、 mCherry、HcRed1、mRaspberry、HcRed-Tandem、mPlum和AQ143。

7.根据权利要求1-6的组合物，其中编码所述两种或更多荧光蛋白 的所述两种或更多基因编码显示相差至少20nm、30nm、40nm、50nm、 60nm、70nm或优选80nm或更多的发射谱的荧光蛋白。

8.根据权利要求1-7的组合物，其中编码所述两种或更多荧光蛋白 的所述两种或更多基因编码显示出60％、80％、100％、120％、160％、 180％或优选更多的相对亮度的荧光蛋白，所述相对亮度是以增强型绿 色荧光蛋白(EGFP)的百分比表示的。

9.根据权利要求1-8的组合物，其中所述组合物另外包含选自转染 促进剂的物质。

10.根据权利要求1-9的组合物，其中所述哺乳动物表达载体系统 由所述微泡封装。