[发明专利]一种检测三种鱼类弹状病毒的试剂盒和核苷酸序列

权利要求书

1.一组检验三种鱼类弹状病毒的寡核苷酸序列，其特征在于：为序列表SEQ IDNo.1至序列表SEQ ID No.9所示的寡核苷酸序列；其中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2为检验传染性造血组织坏死病病毒(IHNV)的引物对，SEQ ID No.3为检验传染性造血组织坏死病病毒(IHNV)的探针序列；SEQ ID No.4和SEQ ID No.5为检验病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的引物对，SEQ ID No.6为检验病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的探针序列；SEQ ID No.7和SEQ ID No.8为检验鲤春病毒血症病毒(SVCV)的引物对，SEQ ID No.9为检验鲤春病毒血症病毒(SVCV)的探针序列。

2.根据权利要求1所述的一组检验三种鱼类弹状病毒的寡核苷酸序列，其特征在于：所述探针序列SEQ ID No.3的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团MGB。

3.根据权利要求1所述的一组检验三种鱼类弹状病毒的寡核苷酸序列，其特征在于：所述探针序列SEQ ID No.6的5’端标记荧光报告基团VIC，3’端标记淬灭荧光基团MGB。

4.根据权利要求1所述的一组检验三种鱼类弹状病毒的寡核苷酸序列，其特征在于：所述探针序列SEQ ID No.9的5’端标记荧光报告基团NED，3’端标记淬灭荧光基团MGB。

5.一种检测三种鱼类弹状病毒的试剂盒，50tests/盒，由以下试剂组成：

(1)TRIZOL裂解液；

(2)DEPC水；

(3)RT-PCR反应液：14μl/检测，其组分为：含15mM Mg²⁺的M-MLV 5×反应缓冲液，10mM dNTP，IHNV引物对IHNV FP/IHNV RP，各10μM，VHSV引物对VHSV FP/VHSV RP，各10μM，SVCV引物对SVCV FP/SVCV RP，各10μM，10μM IHNV探针，10μM VHSV探针，10μM SCVC探针，DEPC水；

(4)RNase抑制剂，40U/μl；

(5)M-MLV反转录酶，200U/μl；

(6)Taq DNA聚合酶，5U/μl；

(7)阴性对照：DEPC水

(8)阳性对照：IHNV、SVCV、VHSV三种病毒体外转录的RNA片段；

RT-PCR反应液中，IHNV FP为序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，IHNV RP为序列表SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，VHSV FP为序列表SEQ ID No.4所示的核苷酸序列，VHSV RP为序列表SEQ ID No.5所示的核苷酸序列，SVCV FP为序列表SEQ ID No.7所示的核苷酸序列，SVCV RP为序列表SEQ ID No.8所示的核苷酸序列，IHNV探针为序列表SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，其5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团MGB，VHSV探针为序列表SEQ ID No.6所示的核苷酸序列，其5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团MGB，SCVC探针为序列表SEQ ID No.6所示的核苷酸序列，其5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团MGB。