[发明专利]一种制备β－淀粉样多肽1－42纯品的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种多肽的制备方法，特别涉及一种利用高效液相色谱制备β-淀粉样多肽1-42纯品的方法。

背景技术：

阿尔茨海默病(Alzheimer’sDisease，AD)是一种发病率高、危害极大的中枢神经系统退行性疾病，主要临床症状是智力进行性减退，特征性病理学改变是老年斑，神经元纤维缠结，以海马、皮层区域为主的神经元数目减少。β-淀粉样多肽1-42(Amyloidβ1-42peptide，简称Aβ42)是存在于阿尔茨海默病患者脑组织中的特异病理改变之物，同时它在AD患者的脑积液及血浆中有所改变。研究表明Amyloidβ1-42peptide在脑内的沉积是阿尔茨海默病的主要原因，因此纯品Amyloidβ1-42peptide对阿尔茨海默病的病理研究有非常重要的作用。

目前对Amyloidβ1-42peptide粗品的制备方法报道的很少，而使用高效液相色谱方法进行制备的报道仅有一篇(Vydac Advance，1997)，且要求有柱温箱，使用的流动相体系比较繁琐，不利于用于生产工艺。

发明内容：

本发明的目的是提供一种用高效液相色谱方法制备Amyloidβ1-42peptide纯品的方法。以解决现有高效液相色谱方法进行制备存在的设备要求高、使用的流动相体系比较繁琐的技术问题。

本发明的技术方案如下：

一种制备β-淀粉样多肽1-42纯品的方法，采用高效液相色谱方法。包括以下步骤：

1、β-淀粉样多肽1-42粗品的溶解在乙腈水溶液中，超声处理，滤膜过滤，取滤液待用。

2、以高效液相色谱仪对过滤后粗品进行制备，通过制备色谱柱采用紫外检测器对样品进行监测，分段收集需要的目标产物，制备色谱条件为：

色谱柱：PLRP-S(刚性聚合物填料)，10-15μm，21.2×250mm(I.D)，

流动相：A：100％水/0.1-0.2％三氟乙酸

        B：100％乙腈/0.1-0.2％三氟乙酸

时间(min)         A              B

0.01              90-70％        10-30％

25                10-30％        70-90％

30                90-70％        10-30％

流速：15ml/min

波长：220nm

3、以分析高效液相色谱仪对收集到的目标产物进行检测，将含量95％以上部分合并为合格产品。

4、将合格产品进行浓缩、冷冻干燥，得到白色絮状粉末产品，经检测合格即为最终产品。

按照本发明，所述的Amyloidβ1-42peptide的高效液相色谱制备方法，色谱柱是使用聚苯乙烯-聚乙烯基苯为基质的聚合物树脂填料。

本发明所述的流动相体系为水、乙腈体系，加入0.1-0.2％三氟乙酸作为离子对试剂。

本发明所用的样品溶解条件为体积比：乙腈∶水＝30-50∶70-50。

本发明所述的样品上样量为21.2mm内径的制备柱每针上样品100-200mg。

本发明的有益效果：解决了现有Amyloidβ1-42peptide的纯品制备方法使用的流动相都比较繁琐，而且要使用柱温箱，增加了仪器的生产成本，也不利于放大生产的技术问题，本发明所述的制备方法，使用的流动相是在高效液相色谱中非常常用的试剂，除了高效液相色谱仪不再需要别的仪器，既节省成本又能够简单、快速地得到需要的纯品。

附图说明：

图1为PLRP-S填料色谱柱的粗品色谱图；

图2为C18键合相填料色谱柱的粗品色谱图；

图3为三氟乙酸乙腈由30％到50％的制备色谱图；

图4为三氟乙酸乙腈由10-30％到90-70％的制备色谱图；

图5为合格产品的检测色谱图。

具体实施方式：β-淀粉样多肽1-42粗品的溶解，过滤：称取100-200mg β-淀粉样多肽1-42粗品溶于10ml的乙腈水溶液中，乙腈水溶液由30-50％乙腈与70-50％水的混配，超声处理，待样品完全澄清，用0.45μ有机相滤膜(上海亚东核级树脂有限公司)过滤，取滤液待用。

色谱条件：