[发明专利]大肠杆菌热敏性肠毒素双突变体作为疫苗黏膜免疫佐剂

权利要求书

1.一种分离的大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白，其特征在于，所述的蛋白 包括大肠杆菌热敏性肠毒素蛋白的A亚基和B亚基，且该A亚基的氨基酸序列相对 于野生型大肠杆菌热敏性肠毒素的A亚基的氨基酸序列，

其第63位为K，且第192位为G；或

其第72位为R，且第192位为G。

2.如权利要求1所述的蛋白，其特征在于，所述的蛋白含有1个大肠杆菌热 敏性肠毒素蛋白的A亚基，和5个大肠杆菌热敏性肠毒素蛋白的B亚基。

3.一种分离的核酸，其特征在于，所述的核酸编码权利要求1或2所述的蛋 白。

4.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求3所述的核酸。

5.一种细胞，其特征在于，所述的细胞内含有权利要求4所述的载体，或其 基因组中整合有权利要求3所述的核酸。

6.一种生产权利要求1或2所述的蛋白的方法，其特征在于，包括：在适于 表达的条件下，培养权利要求5所述的细胞，从而表达权利要求1或2所述的蛋白。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，包括：

(1)在细胞内表达大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白的A亚基和B亚基；

(2)收集(1)的细胞，用变性剂重悬后将细胞破碎；

(3)将(2)的细胞破碎产物混匀，离心收集上清；

(4)从(3)获得的上清中分离含有A亚基与B亚基的蛋白，复性，获得所 需蛋白。

8.权利要求1或2所述的蛋白的用途，其特征在于，用于制备黏膜免疫的佐 剂。

9.一种用于黏膜免疫的组合物，其特征在于，所述的组合物含有：有效量的 权利要求1或2所述的蛋白，作为黏膜免疫的佐剂。

10.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述的组合物中还含有：有 效量的黏膜免疫的疫苗。