[发明专利]抱茎苦荬菜黄酮提取物及制备方法和应用

权利要求书

1、一种主要含有抱茎苦荬菜黄酮提取物，其特征是所述提取物木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷，含量为25.0％-99.5％。

2、根据权利要求1所述抱茎苦荬菜黄酮提取物的制备方法，其特征在于继续纯化得到一单体化合物，经HPLC面积归一化法测定其纯度可达到98.0％以上，可作为含有抱茎苦荬菜及提取物的药品的质量标准检测项目。

3、根据权利要求1所述含有木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷的抱茎苦荬菜提取物的制备方法，其特征是按如下步骤操作：

1)、提取：将抱茎苦荬菜药材，切段，用0-30％乙醇溶液加热提取2-3次，每次1-3小时，过滤，滤液浓缩至药材重量的0.5-2.0倍的浓缩液A；

2)、醇沉淀：取浓缩液A，澄清板过滤，滤液加入乙醇，使含醇量50％-80％，静置过夜，过滤，减压浓缩，得浓缩液B；

3)、冷藏和高温处理：将浓缩液B加水稀释，过滤，滤液于0℃-10℃放置48小时以上，过滤，滤液于灭菌柜中121℃加热0.5-1.5小时，室温下澄清板过滤，得滤液C；

4)、超滤：取滤液C，先后经过0.1μm，6-8万和1.0万分子量的超滤膜组件进行超滤，将终级滤液减压浓缩，得到浓缩液D；

5)、大孔树脂分离：浓缩液D通过按常规方法处理过的大孔树脂柱，先用5％-10％乙醇洗脱2-10个柱体积，再用50％-70％乙醇洗脱1-10个柱体积，收集洗脱液，减压浓缩，得抱茎苦荬菜浓缩液E(1)；或减压(或冷冻)干燥，得到含木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为25％-80.0％的抱茎苦荬菜提取物E(2)。

4、根据权利要求2所述的提取苦荬菜黄酮提取物的制备方法，其特征在于进一步分离纯化，主要采用以下操作方法中的一种或几种联用完成的：

1)取抱茎苦荬菜浓缩液E(1)，反复经聚酰胺柱层析，先后用水和20％-70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，滤过，0-5℃放置24小时以上，过滤，沉淀再经乙醇或甲醇重结晶，得到浅黄色结晶性木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷单体化合物，纯度98％以上；

2)取抱茎苦荬菜浓缩液E(1)，用Na₂CO₃、或NaHCO₃调成弱碱性pH值7.0-9.0，过滤，滤液用正丁醇萃取2-5次，正丁醇萃取液弃去；萃取后碱液用盐酸调pH值至1.0-5.0，用正丁醇萃取2-8次，合并正丁醇提取液，减压浓缩至干，再选用0-60％乙醇溶液加热溶解，过滤，0-5℃冷藏，待结晶完全后，过滤，减压干燥，获得含木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80％-98.5％的抱茎苦荬菜提取物；

3)取抱茎苦荬菜提取物E(2)，加30％-80％乙醇提取，提取液减压浓缩，浓缩液于0℃-10℃放置，待结晶析出彻底后，分离出结晶物，再选用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、盐酸、醋酸和甲酸中的一种或数种加热溶解，0-5℃冷藏，析晶，过滤，获得含木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80％-98.5％的抱茎苦荬菜提取物；

4)取抱茎苦荬菜浓缩液E(1)或提取物E(2)，加乙醇溶液使乙醇含量40％-80％，超声或加热使溶解，过滤，用酸(可选用盐酸，硫酸，甲酸，醋酸，磷酸)溶液调节pH值1.0-5.0，冷藏、待结晶析出完全，过滤，沉淀用酸水和酸性醇洗涤1-3次，再用水或醇洗涤至洗液近中性；用乙醇或甲醇重结晶1次，得到含木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷含量为80％-98.5％的抱茎苦荬菜提取物。

5、根据权利要求1所述的一种含有抱茎苦荬菜黄酮提取物，其特征在于能作为控制含有抱茎苦荬菜提取物及提取物制备的药品的质量标准含测指标为高效液相色谱法；

对照品溶液的制备：精密称取对照品木犀草素-7-O-β-D吡喃葡萄糖醛酸苷适量，加甲醇或乙醇溶解制成每1ml含0.3mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取样品，用甲醇或乙醇提取或溶解，定容，即得供试品溶液；

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；45∶55配制的甲醇-0.2％磷酸溶液为流动相；检测波长为348nm；流速1.0ml/min；柱温30℃；

测定法：分别精密吸取对照品溶液2-10μl，供试品溶液2-10μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。