[发明专利]Y型聚乙二醇修饰的G-CSF及其制备方法和应用

权利要求书

1.Y型聚乙二醇化G-CSF，其结构如下式II所示：

R和R’均为甲基；

m和m’表征聚合度，为任何整数且m＝m’，m+m’为600到1500；

j为1-12的整数；

其中所述Y型聚乙二醇与G-CSF中相应于SEQ ID NO：1第17位的赖 氨酸的侧链ε氨基相连。

2.权利要求1的Y型聚乙二醇化G-CSF，其中所述Y型聚乙二醇的总 平均分子量为10000-60000道尔顿。

3.权利要求2的Y型聚乙二醇化G-CSF，其中所述Y型聚乙二醇的总 平均分子量为40000±4000道尔顿。

4.权利要求1-3任一项所述的Y型聚乙二醇化G-CSF，其中所述G-CSF 为从天然来源提取的或通过重组生物技术获得的G-CSF。

5.权利要求4的Y型聚乙二醇化G-CSF，其中所述G-CSF具有SEQ ID NO：1所示的序列。

6.权利要求1-5任一项的Y型聚乙二醇化G-CSF在制备用于治疗需 要用G-CSF治疗的疾病的药物中的应用。

7.权利要求6的应用，其中所述需要用G-CSF治疗的疾病是由严重的 感染、白血病、干细胞移植以及恶性实体瘤放化疗导致的粒细胞减少症。

8.一种制备和纯化权利要求1的Y型聚乙二醇化G-CSF的方法，其包 括如下步骤：

(a)将具有式III的Y形分支结构的聚乙二醇与G-CSF按照质量比蛋白∶ PEG＝1∶6的比例将两者混合，4℃反应得到Y型聚乙二醇化G-CSF；

其中R和R’为甲基；j为1-12的整数；m和m’表征聚合度，为任何 整数；

(b)反应物用10mM NaAc/HAc pH4.0稀释，上到用10mM NaAc/HAc pH4.0平衡的阳离子交换柱，10mM NaAc/HAc+NaCl 160mM pH4.0缓冲液 梯度洗脱，收集第四个活性峰，用10mM、pH7.0的磷酸钠缓冲液平衡的 Sephacryl S-400HR柱，去除大分子高聚物，收集活性峰得到K17位修饰的 Y型聚乙二醇化G-CSF。

9.权利要求8的方法，其中m＝m’且m+m’为600到1500。