[发明专利]用于DNA扩增反应的溶液预处理

说明书

技术领域

本发明涉及溶液预处理。

具体而言，本发明涉及蛋白质溶液的预处理。

优选说来，蛋白质溶液用于脱氧核糖核酸(DNA)的扩增反应，所述预处理确保蛋白 质溶液中存在的任何污染性DNA不能参加DNA扩增反应。

背景技术

核酸的扩增，特别是DNA的扩增，已成为DNA分析工作中广泛使用的工具。在只有 微小量DNA存在的情况下尤其如此。

目前，DNA扩增的最普遍使用方法是聚合酶链式反应(PCR)。

PCR是使用热稳定性DNA聚合酶和两条大约20个碱基的引物来扩增DNA碱基序列 的方法，其中一条引物互补于要扩增序列一端的(+)-链，而另一条引物互补于要扩增序 列另一端的(-)-链。

因为新合成的DNA链可以随后用作相同引物序列的额外模板，引物退火、链延伸和分 离的连续循环，使得目标序列迅速且高特异性的扩增。

如果相关引物可以被显影的话，PCR还可以用于检测所定义序列在DNA样品中的存 在。

DNA聚合酶和其他蛋白质PCR试剂被细菌性(或其他)DNA污染是PCR方法学的主 要问题。以前，这个问题已经由几个作者提出(Bottger，1990；Rand和Houck，1990；Schmitd 等人，1991；Hughes等人，1994；Maiwald等人，1994；HiIaIi等人，1997)。

PCR扩增微小量DNA的能力是它的一个最大优势。不过，这种能力也意味着任何痕量 的污染性DNA也一起被扩增。这种污染性DNA的扩增可能产生令人误解的、不明确的或 者不正确的结果(Wilson等人，1990)。

具体而言，以高度保守和进化性同源真菌性核糖体的16S rRNA基因为目标使用通用引 物来进行系统发生、进化和诊断研究的观念，经常在PCR期间由产生假阳性而被折衷(HiIaIi 等人，1997；Corless等人，2000；Mohammadi等人，2003)。

真菌性DNA在环境中是普遍存在的，几乎在实验室人员处理的任何时期，也可能将污 染性DNA引入到PCR混合物中(Kitchin等人，1990；Millar等人，2002)。

DNA污染的其他源包括：气溶胶(Saksena等人，1991)，可消耗的PCR试剂，塑料 器皿(Millar等人，2002)或商售PCR引物(Goto等人，2005)。

特别是已重复报道，可商售购得的DNA聚合酶是一种最可能的外源性细菌性DNA污 染源(Rand和Houck，1990；Bottger，1990；Schmidt等人，1991；HiIaIi等人，1997；Newsome 等人，2004)。

Schmidt等人(1991)认为，用来生产DNA聚合酶和酶纯化设备(例如色谱柱)的微 生物是将外源性DNA引入到DNA聚合酶的最可能的源。

相反，两项其他研究发现没有证据证明：Taq-聚合酶中的外源性细菌性DNA来源于生 产性生物体，例如大肠杆菌(Escherichia coli)或水生栖热菌(Thermus aquaticus)(Rand和 Houck，1990；Maiwald等人，1994)，污染性DNA被证明与荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)和棕色固 氮菌(Azotobacter vinelandii)最为相关(Maiwald等人，1994)。

此外，Schmidt等人(1991)也已经检测到，污染性DNA来源于各批Tag-聚合酶制剂 中的真核生物。

可是这些研究不考虑源，而是致力于强调外源性DNA普遍存在于可商售购得的Tag- 聚合酶制剂中。