[发明专利]用于DNA扩增反应的溶液预处理无效
申请号: | 200780015509.1 | 申请日: | 2007-03-08 |
公开(公告)号: | CN101432443A | 公开(公告)日: | 2009-05-13 |
发明(设计)人: | 休·威廉·摩根;安德鲁斯·瑞克特 | 申请(专利权)人: | 怀卡托林克有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/10 |
代理公司: | 北京高默克知识产权代理有限公司 | 代理人: | 金 凤 |
地址: | 新西兰汉*** | 国省代码: | 新西兰;NZ |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 dna 扩增 反应 溶液 预处理 | ||
1.一种在DNA扩增反应之前处理溶液的方法,包括以下步骤:
(a)获得一种碱溶液,所述碱溶液没有用于扩增反应的模板DNA,
(b)将具有至少一种活性形式和至少一种惰性形式的结合剂与所述碱溶液混合,
(c)将来自(b)的混合物进行外部刺激,所述刺激将结合剂从惰性形式转化成活性形式, 导致结合剂结合到碱溶液中的任何污染性DNA上,从而使得污染性DNA为不起反应性的, 且当所述溶液随后被用于DNA扩增反应中其间加入模版DNA时污染性DNA不被一起扩 增,
(d)除去外部刺激,由此将结合剂从活性形式转化成惰性形式。
2.一种制备用于DNA扩增反应的溶液的方法,包括以下步骤:
(a)获得一种碱溶液,所述碱溶液没有用于扩增反应的模板DNA,
(b)确定所述碱溶液中污染性外源性DNA的量,
(c)确定要结合所有污染性DNA所需的结合剂浓度,所述结合剂具有至少一种活性 形式和至少一种惰性形式,
(d)将具有至少一种活性形式和至少一种惰性形式的所需浓度的结合剂与所述碱溶液 混合,
(e)将来自(d)的混合物进行外部刺激,所述刺激将结合剂从惰性形式转化成活性 形式,并导致结合剂结合到碱溶液中的任何污染性DNA上,从而使得污染性DNA为不起 反应性的,且当所述溶液随后被用于DNA扩增反应中期间加入模版DNA时污染性DNA 不被一起扩增,
(f)除去外部刺激,由此将结合剂从活性形式转化成惰性形式。
3.根据权利要求1或2中所述的方法,其中所述碱溶液是蛋白质溶液。
4.根据权利要求1—3中任一项所述的方法,其中所述碱溶液是DNA聚合酶溶液。
5.根据权利要求1—4中任一项所述的方法,其中所述碱溶液是Taq聚合酶溶液。
6.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述碱溶液是PCR主要混合物(master mix)。
7.根据权利要求1或2中所述的方法,其中所述碱溶液是RNA制剂。
8.根据权利要求1—7中任一项所述的方法,其中所述DNA扩增反应是PCR。
9.根据权利要求1—8中任一项所述的方法,其中所述刺激为可见光。
10.根据权利要求1—8中任一项所述的方法,其中所述刺激为紫外光。
11.根据权利要求1—10中任一项所述的方法,其中所述结合剂是乙锭单叠氮化物。
12.根据权利要求11中所述的方法,其中所述乙锭单叠氮化物的浓度为1和5ug mL-1之间。
13.根据权利要求11中所述的方法,其中所述乙锭单叠氮化物的浓度约为3ug mL-1。
14.一种用于DNA扩增反应的溶液,其中所述溶液经权利要求1—13中任一项的方法 制得。
15.一种DNA扩增的方法,包括以下步骤:
(a)使用权利要求1—13中任一项的方法制备溶液,和,
(b)在DNA扩增反应中使用来自(a)的溶液。
16.一种制备用于DNA扩增反应的溶液的方法,基本如本文中所附说明书和实施例所 述。
17.一种用于DNA扩增反应的溶液,基本如本文实验例部分1.6、1.7、2.1、2.2、2.3、 2.4和附图所述。
18.一种DNA扩增的方法,基本如本文实验例部分1.6、1.7、2.1、2.2、2.3、2.4和附 图所述。
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