[发明专利]巴氏杆菌耐药性检测芯片

说明书

                        技术领域

本案属于生物物质检测领域，特别涉及检测巴氏杆茵耐药性的芯片。

                        背景技术

巴氏杆菌病(pasteurellosis)主要是由特定血清型的多杀性巴氏杆菌(Pasteurellosis multocida)引起畜禽共患的一种烈性传染病。该病的发病率和死亡率很高，常给养殖业造成较为严重的损失。

大量流行病学调查资料显示，由于抗菌药物的大量使用，导致巴氏杆菌细菌耐药性普遍存在，特别是高耐药菌株的出现，致使多数药物对耐药菌的临床疗效降低或无效。针对目前巴氏杆菌耐药性日益增强的趋势，临床上选择有效的抗巴氏杆菌药物及提高对化学疗法的响应程度，要求对药物的敏感性进行测试。常规检测耐药性的方法有：药物敏感试验、质粒消除试验、质粒指纹图谱技术、基因探针、Southern-blot、PCR、RT-PCR等方法，但是这些方法只能对少量样品进行分析，大约需要一周的时间。目前业界在引用基因技术提高检测效率方面作出了许多贡献。

已知的技术，如中国专利01105981.8公开了一种检测猪产毒多杀性巴氏杆菌毒素抗体的ELISA试剂盒及应用，涉及结核分支杆菌耐药性检测芯片及其制作方法和应用方法，主要是根据已知的结核分支杆菌耐利福平、异烟肼等的基因突变信息，设计相应的结核分支杆菌耐药性寡核苷酸探针，然后将合成的探针固定在经修饰的玻片上，从而构成结核分支杆菌耐药性检测芯片，利用设计的相应引物将结核分支杆菌DNA样品扩增并加入荧光标记处理以后，与芯片杂交，然后用芯片信号分析系统扫描芯片，并对杂交信号进行分析，获得有关结核分支杆菌的耐药性信息。

又如中国专利200520119230.6公开了一种结核杆菌基因突变型检测芯片，涉及结核杆菌的DNA水平诊断的三项指标集成检测基因芯片和基因芯片试剂盒，所述的基因芯片包括基片和反应区域，所述的反应区域包括12-200个探针点，1-10个标准品点。

再如中国专利01105981.8公开了一种结核分支杆菌耐药性检测芯片及其制作方法和应用方法，主要是根据已知的结核分支杆菌耐利福平、异烟肼等的基因突变信息，设计相应的结核分支杆菌耐药性寡核苷酸探针，然后将合成的探针固定在经修饰的玻片上，从而构成结核分支杆菌耐药性检测芯片，利用设计的相应引物将结核分支杆菌DNA样品扩增并加入荧光标记处理以后，与芯片杂交，然后用芯片信号分析系统扫描芯片，并对杂交信号进行分析，获得有关结核分支杆菌的耐药性信息。

已知的技术尚没有针对巴氏杆菌耐药性的检测芯片问世。

                        发明内容

本发明所要解决的问题在于，克服袭用技术存在的上述缺陷，而提供一种巴氏杆茵耐药性检测芯片。

本发明解决技术问题是采取以下技术方案来实现的，依据本发明提供一种巴氏杆茵耐药性检测芯片，包括经过修饰的载玻片，该载玻片上固定一系列寡核苷酸点阵探针，其中：所述载玻片为醛基修饰基片，预制合成的寡核苷酸探针点制于醛基修饰的玻片上，所述探针为针对磺胺耐药基因sulI、sulII、链霉素耐药基因strA、strBy、氯霉素耐药基因CatB2和四环素耐药基因TetG及其突变基因设计的探针。

本发明解决技术问题还可以采用以下措施进一步实现：

前述的巴氏杆茵耐药性检测芯片，其中：所述探针点4个一重复；每个探针长度设计为15-30bp。

前述的巴氏杆茵耐药性检测芯片，其中：针对磺胺耐药基因sulII的突变位点合成的探针是：