[发明专利]一种具有肿瘤靶向性的多肽及其制备方法有效
申请号: | 200710066323.0 | 申请日: | 2007-10-29 |
公开(公告)号: | CN101143895A | 公开(公告)日: | 2008-03-19 |
发明(设计)人: | 董坚;陈明清;刘流;刘为青;张克健 | 申请(专利权)人: | 昆明医学院第一附属医院 |
主分类号: | C07K7/06 | 分类号: | C07K7/06;A61K48/00;A61P35/00 |
代理公司: | 昆明正原专利代理有限责任公司 | 代理人: | 金耀生 |
地址: | 650000*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 具有 肿瘤 靶向 多肽 及其 制备 方法 | ||
1.一种具有肿瘤靶向性的多肽,其特征在于它的氨基酸序列结构为:CASPSGALRSC;或CFPVPGHDLVC;或CFSVPGHDIVC;或CTPMSLSLSEC;或CYTYPLGWHIC。
2.权利要求1所述的具有肿瘤靶向性的多肽的制备方法,其特征在于按以下步骤进行:
1)应用表达108不同序列蛋白多肽的pC89噬菌体肽库与人乳腺癌细胞株MDA-MB-231反复共培养多次;筛选能够穿过细胞膜进入细胞浆和/或细胞核中的表达特异性多肽的噬菌体,体外扩增噬菌体并进行DNA测序,并推导出这些噬菌体上插入的外源氨基酸序列;
2)将上述筛选出的特异性多肽噬菌体与其它人肿瘤细胞及正常细胞进行体外共培养,检测多肽噬菌体的细胞肿瘤特异性;
3)根据上述多肽序列和细胞特异性检测结果,人工合成具有肿瘤靶向性的多肽。
3.权利要求1所述的具有肿瘤靶向性的多肽的检测方法,其特征在于按以下步骤进行:
1)上述合成多肽与不同人肿瘤细胞和正常细胞分别共培养,并检测该多肽序列在无噬菌体外壳蛋白支持下是否仍具有穿细胞膜的功能;
2)构建特异性多肽联合表达载体:即pEGFP-多肽、pGEX-2T-多肽及pGEFP-多肽-毒肽,探测该特异性多肽携带不同分子量目的蛋白入细胞的可应用性;
3)用同位素标记多肽方法进行动物体内组织特导性亲和性实验,探测其体内肿瘤特异性导向表达的特性。
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