[发明专利]运用复合荧光PCR技术检测食源性致病肠杆菌的方法

权利要求书

1.一种运用复合荧光PCR技术检测食源性致病肠杆菌的方法，其特征在于，所使用的引物组序列如下：

引物：

引物序列一：5’CCGTGTACGCTTAGTCGCTTAACCTC

引物序列二：5’TCTTTAAGAATCTGGATCAAGCTGAAA

引物序列三：5’CGAATGTGTCACCACATTCTCACCT

引物序列四：5’GGTAAAGAGGTTCTGACTACACGATG

引物序列五：5’CCCCATCGTGTAGTCAGAACCTCT

引物序列六：5’ATTTGAAGAGGTTTTAACTACATGTTAT

引物序列七：5’ATAACATGTAGTTAAAACCTCTTCAAAT

引物序列八：5’TGAACAGGAGGTTTCTGCGTTAG

引物序列九：5’ATATGTCAACCTCTGACTGATAGTCTGA

引物序列十：5’CTTTATGAAAGCCTGCGAGTAAAG

引物序列十一：5’CTGTTATGCTGGCTATCAGTCCTCT。

2.根据权利要求1所述的一种运用复合荧光PCR技术检测食源性致病肠杆菌的方法，其特征在于，PCR反应体系1中各组分构成比例如下：

成分                浓度          加样量

PCR体系预混合物     2倍           12.5μL

引物序列一：        10μmol/L     0.3μL

引物序列二：        10μmol/L     0.3μL

引物序列三：        10μmol/L     0.6μL

引物序列四：        10μmol/L     0.3μL

引物序列五：        10μmol/L     0.3μL

引物序列六：        10μmol/L     0.6μL

引物序列七：        10μmol/L     0.6μL

DNA样品                           1μL

双蒸水                            8.5μL

总体积                            25μL。

3.根据权利要求1所述的一种运用复合荧光PCR技术检测食源性致病肠杆菌的方法，其特征在于，PCR反应体系2中各组分构成比例如下：

成分    浓度    加样量

PCR体系预混合物     2倍             12.5μL

引物序列八：        10μmol/L       0.3μL

引物序列九：        10μmol/L       0.3μL

引物序列十：        10μmol/L       0.3μL

引物序列十一：      10μmol/L       0.3μL

DNA样品                             1μL

双蒸水                              10.3μL

总体积                              25μL。

4.根据权利要求1所述的一种运用复合荧光PCR技术检测食源性致病肠杆菌的方法，其特征在于，荧光PCR扩增程序及测定扩增片段的熔解温度程序为：

(1)95℃  10分钟；

(2)95℃  15秒；

(3)65℃  30秒；

(4)回到第(2)步，重复40次；

(5)95℃  2分；

(6)梯度升温60℃至95℃每秒上升0.2℃。

5.权利要求1所述的一种运用复合荧光PCR技术在检测食源性致病肠杆菌方面的应用。