[发明专利]扩增多个识别用核酸序列的方法

权利要求书

1. 扩增多个核酸片断的方法，其中，所述核酸片断包含：选自由第1～第n的识别用核酸序列所构成的第1组中的1个识别用核酸序列和选自由第1～第m的扩增用核酸序列所构成的第2组中的1个扩增用核酸序列，所述方法包括：在可以扩增核酸的条件下，通过使用与有可能存在于所述核酸片断混合物中的全部识别用核酸序列的至少一部分序列和扩增用核酸序列的至少一部分序列互补的序列或相同链侧的序列作为引物，从而将含有多种所述核酸片断的核酸片断混合物进行扩增；其中，n为2以上的整数，第1组中所含的第1～第n的识别用核酸序列的碱基序列互不相同，m为1～n的整数，第2组中所含的第1～第m的扩增用核酸序列的碱基序列互不相同。

2. 权利要求1所述的方法，其中，所述扩增为PCR扩增。

3. 权利要求1或2所述的方法，其中，所述识别用核酸序列为标签核酸，所述进行扩增的反应是为了多重检测而用于扩增所述标签的方法。

4. 权利要求3所述的方法，其进一步包括下述步骤：

获得含有成为分析对象的核酸的样品；

将所述成为分析对象的核酸进行扩增；

对于通过扩增获得的扩增产物进行转换为标签序列的反应，从而获得含有多种核酸片断的核酸片断混合物，所述核酸片断包含：选自由第1～第n的识别用核酸序列所构成的第1组中的1个识别用核酸序列和选自由第1～第m的扩增用核酸序列所构成的第2组中的1个扩增用核酸序列；

使用第1～第n的识别用核酸序列引物和第1～第m的扩增用核酸序列引物来扩增所述核酸片断混合物。

5. 权利要求1～4任一项所述的方法，其中，所述第1识别用核酸序列的长度与第1识别用引物的长度相同，同样地，至第n为止的识别用核酸序列的长度也与至第n为止的引物的长度相同，而且，所述第1扩增用核酸序列的长度与第1引物的长度相同，同样地，至第m为止的扩增用核酸序列的长度也与至第m为止的引物的长度相同。

6. 权利要求1～4任一项所述的方法，其中，所述第1识别用核酸序列的长度比第1引物的长度长1个碱基～10个碱基，同样地，至第n为止的识别用核酸序列的长度也比至第n为止的引物的长度长1个碱基～10个碱基，而且，所述第1扩增用核酸序列的长度比第1引物的长度长1个碱基～10个碱基，同样地，至第m为止的扩增用核酸序列的长度也比至第m为止的引物的长度长1个碱基～10个碱基。

7. 权利要求1～6任一项所述的方法，其中，第1～第n、第1～第m的多个引物的含量根据分别互补的识别用核酸序列或扩增用核酸序列而不同。

8. 权利要求1～7任一项所述的方法，其中，该方法中使用的引物在3’末端以外的位置上用标记物质进行了修饰。

9. 用于在权利要求1～8任一项所述的方法中使用的试剂盒，其含有第1～第n的多个引物、通用引物、核酸扩增用酶、缓冲液成分和dNTP混合物。