[发明专利]姬松茸的发酵工艺及其多糖肽的生产方法

说明书

技术领域

本发明属生物工程技术领域。具体涉及一种姬松茸的发酵工艺及其多糖肽的生产方法。

背景技术

姬松茸又称巴西蘑菇、小松菇，是一种珍锋稀食用真菌。其子实体内含有多糖和甾醇类等多种活性成份以及各种微量元素、人体必需的多种氨基酸，对肿瘤、痔疮、神经痛具疗效，还具有降血脂和降胆固醇的作用，是一种很有开发前途的药用真菌。在美国、日本多项研究成果申报了专利。

姬松茸的主要活性成份是姬松茸多糖，多糖组份中以葡萄糖为主，以具有β-(1→6)侧链的β-(1→3)葡聚糖为主要结构。研究结果表明，姬松茸多糖主要通过激活机体免疫系统，增强巨噬细胞的吞噬作用，刺激干扰素的形成，激活机体内自然杀伤细胞，促进免疫球蛋白、白细胞介素的生成，提高淋巴细胞的转化率等而发挥其抗肿瘤作用，在基因水平上有较强的抗化学诱变作用，可用于慢性乙型肝炎及恶性肿瘤放化疗后乏力，白细胞减少，免疫功能降低的综合治疗。

发明内容

本发明的目的在于改进生产工艺，提高菌丝体的得率和多糖肽的产量。

本发明提供了一种姬松茸的发酵工艺及其多糖肽的生产方法。该方法包括下列步骤：(1)姬松茸的育种与特征

用组织分离法获得姬松茸纯菌株AB103，将其接种在PDA或麦芽汁固定斜面培养基上，于25～28℃恒温培养7～10天后，置于4℃左右的冰箱中保存备用。采用紫外诱变法对菌丝细胞进行诱变，紫外照射距离为20～30cm，照射时间为5～15秒。初筛诱变株在固体培养基上的菌丝体生长能力，复筛诱变株在液体培养基中菌丝体生长量和多糖肽产量，获得优质菌株AB103-51。该菌株分类命名为巴西蘑菇(姬松茸)Agaricus blazei，该菌株已于2002年7月16日保存于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心的编号为CGMCCNo.07722001325B。并于2002年7月16日检测结果为存活。

固体培养用40～50％的稻草(或木屑、棉子壳)、1％的蔗糖或葡萄糖、10～20的麸皮或米糠、1％的石膏或碳酸钙，加水拌匀，含水量60％，PH自然，瓶装，在1.5kg/m²的压力下灭菌1小时，冷却后，在无菌操作下摇瓶种子接种于固体培养基内，培养温度22～26℃，20～30天菌丝体布满全瓶。原基萌发后，降低栽培温度22～25℃，保持适当湿度、光照和通风，30～40天后，子实体成熟；(2)菌株的发酵工艺流程

本发明采用通气发酵法生产姬松茸菌丝体，发酵培养基成本低廉，发酵周期短。发酵工艺流程如下：

斜面菌种或茄瓶菌种→摇瓶种子→50-100L³种子罐(一级)→500-1000L³种子罐(二级)→5000-10吨发酵罐。

摇瓶种子的装量75～150ml/250ml或150～150ml/250ml培养基，往复式摇床振荡速度80～150次/分，或旋转式摇床振荡速度100～200转/分，培养温度24～28℃。培养时间2～3天。种子罐和发酵罐投料量50～70％，接种量8～10％，搅拌速度100～200rpm，通气量1∶0.5～1∶1v/vmin，发酵培养时间4～7天。随着发酵培养时间延长，培养基由混浊逐渐变清。发酵液中还原糖、氨态氮、PH都逐渐降低，菌丝体生物量不断增加，至第5～6天时多糖肽产量达最高时终止发酵。(3)姬松茸多糖肽的提取

本发明所述姬松茸AB103-51的多糖肽提取工艺是：姬松茸发酵液用沙芯漏斗抽滤，分离发酵液和菌丝体，工厂可用板框机分离发酵液与菌丝体。将湿菌丝体加10～20倍水浸泡过夜，用90～100℃水浴回流提取2～5小时，过滤，将滤液浓缩后加2～5％倍的95％乙醇0～4℃沉淀8～10小时，干燥得姬松茸多糖肽。

本发明所述经组织分离法得到的AB103菌种，子实体肉质，多数单个，个别丛生。菌盖半球形至平展，直径3～10cm，浅褐色至棕褐色，菌盖表面有纤维状鳞片，边缘有菌幕碎片。菌柄近圆柱形生于菌盖中央，初期为实心，中后期疏松至空心。菌环易脱落。担孢子浅红色至棕褐色，光滑，短椭圆形。菌丝分枝，有横隔，无锁状联合。物理诱变所得的菌株AB103-51在固体木屑麸皮培养基上培养，其子实体形态与天然实体相同。