[发明专利]一种新的多肽——人甲基化－DNA－蛋白－半胱氨酸甲基转移酶16.39和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

对于生命状态的存在和延续来说，DNA分子要求保持高度的精确性和完整性，在长期的进化中，生物体演化出一系列修复系统。甲基化试剂对DNA主要的诱变以及致癌效应是O6-烷基鸟嘌呤的形成。修复含有O6-烷基鸟嘌呤的DNA是由酶6-O-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶)(MGMT)进行的。位于O-6位的烷基基团被转至酶中的一个半胱氨酸残基(Lindahl T.，Sedgwick B.，Sekiguchi M.，Nakabeppu Y.，Annu.Rev.Biochem.57：133-157(1988))。这是一种自杀反应：该酶不可逆地失活，从DNA分子上每除去一个甲基就要消耗一个新的酶分子，而甲基化蛋白作为一种死端式产物聚积。多数但不是所有的MGMT还可修复O-4-甲基胸腺嘧啶。在不同的原核及真核生物中都存在有MGMT，这些酶的活性位点半胱氨酸残基周围的区域是保守的，可作为该家族的特征序列模板：[LIVMF]-P-C-H-R-[LIVMF](2)。

现已发现与肿瘤形成相关的不同的人类基因进行点突变，例如ras，p53以及ERCC-3基因等。这些突变对于激活(致癌基因)或是抑制(肿瘤抑制基因)这些基因是极为重要的，通过烷化剂(例如N-亚硝基化合物等)作用于DNA而引起的点突变参与引发特定的人类癌症。由于MGMT能够特异性修复由烷化剂产生的DNA诱变性损害，因而该酶在细胞中的水平被认为对于决定细胞对烷化致癌物的肿瘤诱变作用的敏感性是关键的因素(Lindahl et al，Annu.Rev.Biochem.(1988)57，133-157；A.E.Pegg，Cancer Res.(1990)50，6119-6129)。

通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本发明的多肽的表达谱与人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39。

由于如上所述人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人甲基化-DNA-蛋白-半胱氨酸甲基转移酶16.39异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；