[发明专利]一种微生物油脂的制备方法

说明书

本发明涉及油脂化工领域，更具体涉及一种微生物油脂的制备方法。

目前从微生物中获得油脂，仅局限于少量的实验室手工操作阶段，用有机溶剂萃取干燥菌丝体中的油。现在进行工业化生产的仅仅到了发酵获得菌粉，这一阶段，溶剂萃取菌丝体中的油，由于菌丝体含油量较高，粉末较大，仅用溶剂油萃取其中所有的油脂，工业化生产困难较大，增加了固液分离难度，并且有机溶剂的残留也使菌油无法达到国家食品添加剂的卫生要求，更不适宜做营养保健品。

本发明的目的是提供了一种微生物油脂的制备方法，通过诱变、筛选突变菌株，提高了菌体含油量和不饱和脂肪酸的含量。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

用来生产本发明所述的微生物油脂的菌种是属于深黄色被孢霉属，其具有较高的菌体含油量和多不饱和脂肪酸的含量。首先对出发菌进行了诱变筛选，深黄色被孢霉Mortierella isabllina AS3.3410株经过紫外光两次诱变，其次是经紫外光加LiCl两次复合诱变，经发酵试验，筛选出Mortierella isabllina AS3.3410突变株5-1-6株。该菌株于2000年8月1日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO.M200017。此株经发酵生物量49g干菌丝/L发酵液，含油率60％左右，产油19.7g/L发酵液，亚麻酸6.18％-7.32％，含十八碳多烯酸的多不饱和脂肪酸占总脂肪酸的44％。关于从菌丝中获得油脂，采用了先压榨出大部分毛油，毛油经精炼后可达到一级食用油标准。菌饼中的残油再用溶剂油萃取，这样就减少了溶剂油用量和溶剂萃取的工作量。这种分步获得微生物油脂的方法可以实行工业化生产。根据菌丝体含油量较高的特点，采取预榨浸出的方式获得油脂；第三是对干燥的菌丝体经过90～115℃，25-35分钟的蒸炒后，压榨，可获得大部分具有菌体所固有香味的预榨油脂，预榨毛油其中不含有机溶剂。剩下的含有约10％油脂的菌饼，用有机溶剂正己烷或其异构体萃取。萃取的有机溶剂含量体积比为0.6-1∶1，温度45-60℃，30-60分钟；第四是浓缩，萃取液在长管蒸发器中的间接蒸汽加热到80-100℃，碟式汽提塔中的直接蒸汽95-120℃，进行浓缩可获得浸出毛油；第五是将预榨毛油和浸出毛油分别打入两个水化锅，加入1/10体积1-5％的盐溶液，加热搅拌到70-90℃，持续10-30分钟，静置冷却4-24小时，将水化好的毛油分别泵入脱溶锅中，通入110-150℃直接蒸汽，3-5大气压的间接蒸汽，真空度为-650～-750mmHg，得到终产品油，由浸出毛油精炼出的油中残溶≤50×10^-6，由预榨毛油中精炼油中残溶为0。

实施例1

将稀释制备好的菌悬液4ml移入经60ml的无菌培养皿中，放入无菌磁力搅拌棒，置磁力搅拌器上，20W紫外灯下30cm处分别照射45″和60″，整个操作均在超净工作台中进行。

在灯下分别取未照射的菌悬液(作对照)和照射过的菌悬液各0.5ml进行不同程度的稀释，取最后3个稀释度的稀释液0.2ml涂于土豆培养基平板上，用准备无菌涂棒涂布，28℃培养3-4天，致死亡率90％以上。

将长出的菌株转接于斜面同时进行摇瓶，培养，显微镜观察对菌体的生长密度和脂肪颗粒，收集干菌体，烘干、测生物量、测含油量，据此选出，两株较好菌株，再重复上述的紫外诱变，筛选，所得菌株，再经紫外照射后，菌悬液，涂布在含在LiCl的土豆培养基上培养、筛选，如此重复两次，即得到Mortierellaisabellina AS3.3410株的高产突菌株5-1-6株，将所得的突变菌株接种于PDA培养基上，培养7天。

再将孢子接种于装有50L料的种子罐中40-45小时，温度28℃，全部移入装有500L料的发酵罐中，72-96小时后可得到24.5kg的干菌体，对干菌体蒸炒30分钟，间接蒸汽温度为105℃后，压榨可得到10kg预榨毛油。

12.5kg的菌饼，加入13L的溶剂在55℃浸泡1小时，收集萃取液，萃取液经长管蒸发器，碟式汽塔中浓缩可得到1.5kg浸出毛油，将浸出毛油入泵水化锅中加热70℃加入0.15kg3％NaCl溶液，搅拌20分钟冷却静置24小时，撇去上层油，泵入脱溶锅真空度-700mmHg，通以130℃直接蒸汽，最后可得残留溶剂为50×10^-6以下成品油1.45kg。

预榨毛油水化脱水过程，同浸出毛油处理过程，可得到11.5kg左右的成品油，两种油分开，预榨毛油的风味更好些。

实施例2