本发明公开了一种与RSV病毒感染相关的环状RNA及其应用。本发明环状RNA包括RSC1‑10以及rsv_circ_449、rsv_circ_482、rsv_circ_664、rsv_circ_969、rsv_circ_305、rsv_circ_443、rsv_circ_526、rsv_circ_561,其序列依次如SEQ ID NO:1‑18所示。本发明提供一种可抑制RSV感染的环状RNA,并将该环状RNA作为标志物或治疗靶标,用于制备预防或治疗RSV感染的药物、制备预防RSV感染的疫苗、或者制备检测RSV感染的试剂盒,填补了目前没有较好的治疗RSV
重组蛋白为RSV的F蛋白,即RSV‑F,所述RSV‑F的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.1,所述RSV‑F蛋白的氨基酸序列为序列表SEQ ID No.2。所述重组蛋白的表达方法包括:1)RSV‑F编码片段的扩增;2)根据扩增后的RSV‑F编码片段构建包含F蛋白的亚克隆质粒;3)根据所述亚克隆质粒构建RSV‑F的真核表达质粒;4)转染所述RSV‑F的真核表达质粒于纯化后的RSV‑F重组蛋白,具有免疫原性,可用于RSV亚单位疫苗的研发或者RSV感染的免疫诊断。
本发明公开基于反向遗传学构建的RSV反基因组质粒,所述RSV反基因组质粒为如序列表SEQ ID No.1所示的质粒pBRB‑RSV‑rLong/A2cp、如序列表SEQ ID No.2所示的质粒pBRB‑RSV‑rLong/A2cpts或如序列表SEQ ID No.3所示的质粒pBRB‑RSV‑rLong/A2cptsΔSH。本发明构建的重组质粒经拯救获得的重组RSV病毒具有明显的减毒效果,可用于制备RSV减毒活疫苗。
本发明公开一种重组RSV反基因组质粒rRSV‑EGFP,其序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了由上述质粒经拯救获得的重组RSV以及其在筛选抗RSV药物中的应用。本发明筛选抗RSV药物的高通量筛选方法,包括:接种宿主细胞,加入重组RSV和待筛选药物;检测GFP荧光强度;评价待筛选药物的抗RSV效果。本发明利用表达绿色荧光蛋白的重组RSV与宿主细胞和待筛选化合物相互作用,由于绿色荧光蛋白的表达水平与病毒复制水平密切相关可以通过检查荧光强度分析化合物的抗病毒作用,进而建立针对RSV的高通量药物筛选模型,进行大规模的药物筛选,为抗RSV药物的研发奠定基础。