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[发明专利]用于体内检测核酸引导的核酸酶编辑的细胞的Cascade/dCas3互补测定-CN202080088530.X在审
发明人：阿米尔·米尔;安德鲁·加斯特;斯蒂芬·费德罗维奇;凯尔·西蒙 -专利权人：因思科瑞普特公司
申请日： 2020-12-15 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本公开内容涉及允许人们在采用核酸引导的编辑时鉴定体内编辑的细胞的方法和组合物。另外提供了用于执行编辑和选择方法以及使用组合物的自动化多模块仪器。
用于体内检测核酸引导核酸酶编辑细胞 cascade dcas3 互补测定

[发明专利]功能化的dCas9修饰蛋白及其在检测核酸中的应用-CN202010964949.9在审
发明人：高玉舟;乔善鹏;刘珍妮;李海超;何欣 -专利权人：济南国科医工科技发展有限公司
申请日： 2020-09-15 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种功能化的dCas9修饰蛋白及其在检测核酸中的应用，属于生物工程技术领域。本发明在dCas9基础上修饰得到两种功能化蛋白dCas9‑biotin和dCas9‑AP，在此基础上构建一种新型的检测核酸的化学发光方法；其中，通过固相修饰的dCas9‑biotin对DNA进行特异性捕获，通过碱性磷酸酶标记的dCas9进行定量检测，可实现体系中0.42fmol核酸(3.6kbp)的检出；dCas9‑biotin和dCas9‑AP的夹心识别更提高检测体系的特异性，为进一步降低核酸检测假阳
功能 dcas9 修饰蛋白及其检测核酸中的应用

[发明专利]精准调控Bacillus subtilis内源多基因表达的CRISPRa方法及其应用-CN202310086553.2在审
发明人：张炳坤;廖朝勇;崔健;呙于明 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2023-02-09 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明的重组枯草芽孢杆菌含有名称为dCas9‑α的蛋白质的编码基因，转录激活因子xylR的编码基因，其中dCas9‑α是由dCas9蛋白和RNA聚合酶II的α亚基连接而成的融合蛋白，RNA聚合酶II的α亚基连接在dCas9蛋白的C端。通过将A3E3表达盒导入上述重组枯草芽孢杆菌，得到的重组枯草芽孢杆菌的甲萘醌‑7产量显著提高，为研究枯草芽孢杆菌的特定生物功能提供了技术基础。
精准调控 bacillus subtilis 内源多基因表达 crispra 方法及其应用

[发明专利]一种利用dCas9-p450系统进行定点突变的方法-CN202110927367.8在审
发明人：赵书红;阮进学;苏寅钰;李新云;赵广兴;韩晓松;熊友才;庄荣志;聂雄伟;刘艳文;王伟;李长春;谢胜松 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-08-10 - 公布日： 2023-02-17 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用dCas9‑p450系统进行定点突变的方法。本发明具体地公开了一种将细胞色素p450氧化酶(CYP)家族的关键酶CYP3A4蛋白与dCas9(dead Cas9)蛋白融合形成的融合蛋白及dCas9‑P450系统，所述dCas9‑P450系统包括重组载体dCas9‑p450、sgRNA表达载体、黄曲霉毒素B1(AFB1)，并公开了利用该系统将p450酶在特定基因组区域高表达，从而使得该区域的AFB1代谢成为AFBO，AFBO与靶位点DNA形成络合物，在靶位点定点引入随机突变的方法
一种利用 dcas9 p450 系统进行定点突变方法

[发明专利]稳定转染CRISPR/dCas9系统的单克隆细胞株的构建方法及其应用-CN202210395180.2有效
发明人：李道传;姜姝芸;徐驰;王庆 -专利权人：中山大学
申请日： 2022-04-15 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了稳定转染CRISPR/dCas9系统的单克隆细胞株的构建方法，包括如下步骤：1)慢病毒转染；2)超速离心；3)细胞感染和第一次流式荧光分选；4)第二次流式荧光分选。本发明属于基因工程技术领域，本发明通过将慢病毒转染法、超速离心法和流式荧光分选法相结合，提供一种稳定转染CRISPR/dCas9系统的单克隆细胞株的构建方法及其应用，克服了CRISPR/dCas9系统难转染、不能长时间稳定表达的缺陷，实现了CRISPR/dCas9系统的稳定表达，可实现对DNA甲基化的靶向调控。
稳定转染 crispr dcas9 系统单克隆细胞株构建方法及其应用

[发明专利]使cas3系统可以精确敲除的方法-CN202210391619.4在审
发明人：李占军;李金泽;隋婷婷;赵丁 -专利权人：吉林大学
申请日： 2022-04-14 - 公布日： 2022-09-06 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：一种使cas3系统可以精确敲除的方法，属于生物工程技术领域。本发明的目的是通过控制cas3介导的缺失的大小，可以使敲除大小保持在预期范围内的使cas3系统可以精确敲除的方法。本发明步骤是：将cas9点突变成dcas9，将突变好的产物进行转化和质粒扩繁，细胞靶向位点的cas3的crRNA的制备，细胞靶向位点的dcas9的gRNA的设计，crRNA和74707表达载体的构建。本发明通过dcas9和其gRNA的空间位阻作用将cas3的运动阻碍，使其无法继续降解，从而达到精确敲除。
cas3 系统可以精确方法

[发明专利]一种陆地棉基因组的高效定向基因调控的编辑方法-CN202110572919.8在审
发明人：金双侠;张献龙;王茂军;李波;惠凤娇 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-05-25 - 公布日： 2021-08-20 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种陆地棉基因组的高效定向基因调控的编辑方法，本发明对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的GhBE3‑Dcas9载体进行改造，以6TAL‑2VP64+2linker+dCas9融合蛋白取代原有的APOBEC1‑XTEN‑dCas9‑UGI蛋白，构建在棉花中具有定向上调单个基因表达量的载体Gh‑dCas9‑TV。选取GhEPSP和GhPAP1D为目标基因验证Gh‑dCas9‑TV在棉花中的应用。
一种陆地棉基因组高效定向基因调控编辑方法

[发明专利]一种人工转录激活因子dCas9-TV及其编码基因与应用-CN201710896593.8有效
发明人：李剑峰;黎镇祥;张丹丹;熊翔宇 -专利权人：中山大学
申请日： 2017-09-28 - 公布日： 2021-05-07 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效的人工转录激活因子dCas9‑TV及其编码基因与应用。本发明在核酸酶失活的Cas9蛋白(dCas9)的羧基端连上多个拷贝的VP64和TAL转录激活结构域，产生一系列新型的人工转录激活因子，并筛选出转录激活活性最好的dCas9‑TV。当仅使用一个向导RNA(gRNA)靶向特定基因启动子时，dCas9‑TV能高效地激活拟南芥和水稻内源基因的转录。使用多个gRNA分别靶向多个靶基因时，dCas9‑TV能同时实现多基因的转录激活。另外，dCas9‑TV被证实在人类细胞中同样具有高效的靶向转录激活活性。利用体外组装的dCas9‑TV/gRNA核糖核蛋白复合体也能对拟南芥和水稻内源基因进行转录激活。
一种人工转录激活因子 dcas9 tv 及其编码基因应用

[发明专利]包括人类在内的生物体细胞中的转录产物、转染RNA及其纯化复合物的工具-CN202280009159.2在审
发明人：伊藤达男;清水由梨香 -专利权人：学校法人川崎学园
申请日： 2022-01-04 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种衍生自CRISPR‑dCas(死Cas)蛋白或CRISPR‑Cas蛋白的CRISPR‑dCas/Cas蛋白衍生物或CRISPR‑dCas/Cas蛋白衍生物集，所述CRISPR‑dCas(Cas)蛋白具有螺旋区，能够与向导RNA和靶RNA形成复合物，并且不具有核酸酶活性，以及所述CRISPR‑Cas蛋白具有螺旋区，能够与向导RNA和靶RNA形成复合物，并且具有核酸酶活性，所述CRISPR‑dCas/Cas蛋白衍生物或CRISPR‑dCas/Cas蛋白衍生物集包括：N结构域，所述N结构域包含CRISPR‑dCas(死Cas)蛋白或CRISPR‑Cas蛋白的螺旋区的N端侧，C结构域，所述C结构域包含，具有所述第一因子和所述第二因子的CRISPR‑dCas/Cas蛋白衍生物通过含有蛋白酶识别序列的连接子结合，或通过含有自裂解肽的连接子结合，或非共价结合，所述CRISPR‑dCas/Cas蛋白衍生物因此具有)的结构，或(N结构域)‑(第一因子)‑(含有自裂解肽的连接子)‑(第二因子)‑(C结构域)的结构，或(N结构域)‑(第一因子)‑(非共价键)‑(第二因子)‑(C结构域)的结构，以及所述CRISPR‑dCas
包括人类在内生物体细胞中的转录产物转染 rna 及其纯化复合物工具

[发明专利]多酶偶联定位体系及其构建方法和应用-CN202110550828.4在审
发明人：申晓林;童贻刚;陈昕;周朝;袁其朋;王佳;孙新晓 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2021-05-20 - 公布日： 2021-08-17 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明提供了一种多酶偶联定位体系，包括dCas蛋白‑linker‑目标酶融合质粒、引导RNA质粒和DNA支架质粒；所述dCas蛋白‑linker‑目标酶融合质粒在所述引导RNA质粒的引导下锚定在所述DNA所述dCas蛋白‑linker‑目标酶融合质粒中的目标酶通过linker与dCas蛋白连接。所述目标酶是目标产物生物合成途径中所需的酶。所述DNA支架质粒包含多个dCas结合位点。
多酶偶联定位体系及其构建方法应用

[发明专利]一种单质粒系统的CRISPRi载体及其制备方法-CN201610839312.0有效
发明人：钟云鹏;朱沛煌;李彦敏;杨平 -专利权人：苏州泓迅生物科技有限公司
申请日： 2016-09-22 - 公布日： 2017-03-08 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种单质粒系统的CRISPRi载体及其制备方法，dCas9载体的序列如SEQ ID NO.6所示，图谱如附图2所示，CRISPRi载体通过将含有sgRNA启动子和sgRNA scaffold的基因片段重组到经酶切的dCas9载体中获得。发明利用CRISPRi技术，将dCas9蛋白和sgRNA scaffold构建到一个质粒系统中，实现在一个质粒中同时表达sgRNA和dCas9蛋白。该系统仅需要一次构建、一次转化即可实现sgRNA和dCas9蛋白的表达，该法过程简单、高效、快捷，大大简化质粒构建流程，缩短实验周期，提高工作效率。
一种质粒系统 crispri 载体及其制备方法

[发明专利]一种鸡TDRD1基因启动子区域组蛋白甲基化水平的调控方法-CN202310028001.6在审
发明人：靳锴;李新林;高晓敏;薛倩;韩威;李碧春;左其生;张亚妮;牛英杰;孙红艳 -专利权人：扬州大学;江苏省家禽科学研究所
申请日： 2023-01-09 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明的方法包括如下步骤：(1)设计并扩增得到靶向鸡TDRD1基因启动子区域的sgRNA；(2)将酶切后的dCas9‑LSD1载体与步骤(1)的sgRNA连接，得到具有靶向性的dCas9‑LSD1打靶载体；(3)将所述dCas9‑LSD1打靶载体转染入细胞中，来调控鸡TDRD1基因启动子区域组蛋白甲基化水平。本发明构建的dCas9‑LSD1打靶载体可以作用于特定基因局部的启动子区位点，可以调控区域性的组蛋白甲基化水平，还可以明确在鸡SSC发育过程中组蛋白甲基化修饰区域。
一种 tdrd1 基因启动子区域组蛋白甲基化水平调控方法

[发明专利]一种用于FISH的快速标记基因组探针及其制备方法和应用-CN201910868305.7在审
发明人：周勇;唐银 -专利权人：重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司
申请日： 2019-09-16 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12Q1/6841 文献下载
摘要：所述制备方法包括以下步骤：制备带有荧光染料标记的dcas9蛋白，再针对目标基因区域设计并合成sgRNA库，最后将带荧光染料标记的dcas9蛋白与sgRNA库混合得到sgRNA‑dcas9酶探针库。本发明制备所得sgRNA‑dcas9酶探针采用dCas9介导的FISH技术利用CRISPR系统进行DNA快速杂交，具有检测时间短（可在1小时内完成检测），准确性高，特异性好、假阳性低、操作条件温和（室温和
制备荧光染料标记探针蛋白制备方法和应用目标基因区域基因组探针技术利用快速标记快速杂交细胞形态假阳性检测介导合成灵活

[发明专利]一种维生素D3产量提高的酵母菌-CN202110267085.X在审
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;曲丽莎 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-03-11 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及一种维生素D3产量提高的酵母菌，本发明利用dCas9系统动态调控ERG6基因，该系统的引入可以将酿酒酵母细胞分为前期细胞生长阶段和后期产物积累阶段。前期dCas9系统不发挥对ERG6基因的抑制作用，细胞实现正常生长繁殖，后期当OD进入较高水平时，dCas9系统发挥动态调控作用，抑制ERG6基因的正常转录，阻断7‑DHC的竞争途径，实现代谢流更大限度的流向目标产物
一种维生素 d3 产量提高酵母菌

[发明专利]果蝇生殖系统中高效的转录激活系统-CN201811312144.5有效
发明人：朱丽霏;倪建泉;徐荣刚;毛德才;孙锦;贾豫 -专利权人：清华大学
申请日： 2018-11-06 - 公布日： 2021-01-01 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：所述转录激活系统包括dCas9蛋白表达元件和sgRNA表达元件，所述dCas9蛋白表达元件上含有p‑转座酶启动子、dCas9蛋白编码序列、MCP蛋白编码序列和转录激活因子编码序列，所述转录激活因子编码序列位于所述dCas9蛋白编码序列的下游，所述MCP蛋白编码序列位于所述dCas9蛋白编码序列的下游；所述sgRNA表达元件上含有U6B启动子、sgRNA插入位点和MCP蛋白识别序列。
果蝇生殖系统高效转录激活系统

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