利用嘧啶核苷磷酸化酶或尿嘧啶核苷磷酸化酶,以及嘌呤核苷磷酸化酶,催化底物合成含有保护基的核苷;底物包括底物核苷、底物碱基和底物磷酸盐,底物碱基上含有保护基;嘧啶核苷磷酸化酶包括与SEQ ID NO:1所示的蛋白质PyNP具有80%以上同源性的蛋白质;尿嘧啶核苷磷酸化酶包括与SEQ ID NO:2所示的蛋白质UP具有80%以上同源性的蛋白质;嘌呤核苷磷酸化酶包括与SEQ ID NO:3、7或8所示的蛋白质PNP具有80%以上同源性的蛋白质。
本发明涉及分子生物学技术领域,特别是涉及一种分离的蛋白,所述蛋白在植物体内的表达水平与所述植物的抗逆性相关,所述蛋白为如下(1)或(2)蛋白质;(1)氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的蛋白质;(2)与(1)蛋白质具有至少80%同源性、且具有(1)蛋白质功能的蛋白质。该蛋白质可以用于提高植物,特别是饲草植物的抗逆性,增加饲草植物的经济效益。
本发明公开一种基于gp5.5蛋白质的大肠杆菌总tRNA纯化方法,所述gp5.5蛋白质来自T7噬菌体基因5.5编码的小蛋白质或来自与所述T7噬菌体gp5.5蛋白质序列同源性高于30%并含有如序列表SEQID NO.1所示特征氨基酸序列,且总氨基酸序列数目在90~110之间的其他噬菌体编码的同源蛋白质;序列表SEQ ID NO.4为携带组氨酸标签及连接肽段的T7噬菌体gp5.5蛋白质氨基酸序列,所述蛋白质保守性较高,与其他噬菌体表达的同源蛋白质序列相似性较高。本发明通过高通量测序首次确证gp5.5蛋白质能结合大肠杆菌细胞内所有种类tRNA,且特异性极高。依赖gp5.5蛋白质分离纯化大肠杆菌总tRNA方法,利用了天然生物大分子相互作用特性,本发明方法快捷方便,无需传统繁琐纯化步骤,得到tRNA纯度显著提高,优势明显。