本发明涉及一种转基因动物毛色报告基因表达载体构建及其应用。该表达盒是由依次串联的两个人TYR增强子,人TYR启动子,小鼠TYR基因和bGH polyA组成;其序列如SEQ ID NO.13所示。本发明还公开了含有该表达盒的表达载体,将表达载体转入毛色为白色的宿主动物基因组,转基因表达后,产生黑色素沉积,能够在宿主动物的皮肤、毛发等部位肉眼直接观察到毛色变化,直接反应目的基因表达情况。应用本发明中构建的载体,以小白鼠为宿主动物制备转基因鼠,成功获得转基因后代,并观察到毛色变化,获得黑鼠,表明该载体可以作为报告基因应用。