本发明公开了一种用于高效构建无抗性标记重组分枝杆菌的抗性表达盒。该抗性表达盒含有精简后的潮霉素抗性基因（SEQ ID NO:1所示），以及位于潮霉素抗性基因两端的dif1和dif2序列。本发明精简后的Hyg基因序列由原来的1.7kb缩短至1kb左右，去掉了转录终止子，较长的天然启动子等复杂结构，便于PCR扩增，内部酶切位点更少（常见酶切位点已被定点突变掉），同时，Hyg自带短的人工启动子，在大肠杆菌和分枝杆菌中均可表达，定向插入时不影响下游基因的转录和翻译。本发明的抗性表达盒在精简后的Hyg基因两端添加了dif序列，可以在分枝杆菌中自动解离。Hyg基因丢失后，被破坏的基因仍可继续表达缩短的小肽，不影响下游基因的翻译，从而可有效避免极性效应。
本发明公开了一种用于高效构建无抗性标记重组分枝杆菌的抗性表达盒。该抗性表达盒含有精简后的潮霉素抗性基因（SEQ ID NO:1所示），以及位于潮霉素抗性基因两端的dif1和dif2序列。本发明精简后的Hyg基因序列由原来的1.7kb缩短至1kb左右，去掉了转录终止子，较长的天然启动子等复杂结构，便于PCR扩增，内部酶切位点更少（常见酶切位点已被定点突变掉），同时，Hyg自带短的人工启动子，在大肠杆菌和分枝杆菌中均可表达，定向插入时不影响下游基因的转录和翻译。本发明的抗性表达盒在精简后的Hyg基因两端添加了dif序列，可以在分枝杆菌中自动解离。Hyg基因丢失后，被破坏的基因仍可继续表达缩短的小肽，不影响下游基因的翻译，从而可有效避免极性效应。
