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[发明专利]一种小鼠睾丸组织外泌体的提取方法-CN202310605543.5在审
发明人：李根亮;罗绿景;刘会婷;唐玉莲;孙丽双;李书;黄师;莫茵茵;陈峥宇 -专利权人：右江民族医学院
申请日： 2023-05-26 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种小鼠睾丸组织外泌体的提取方法，该方法包括以下步骤：(1)取新鲜小鼠睾丸组织用4℃预冷的含1％青‑链霉素的PBS溶液洗涤3次，冰上剪碎组织；(2)将剪碎的组织置于无外泌体完全培养基培养；(3)收集培养上清液；(4)通过离心去除上清液中的组织碎块；(5)取上清液离心，去除上清液中的细胞碎片；(6)取离心的上清液，用0.22μm过滤器过滤除菌；(7)将滤液离心，得到外泌体沉淀；(8)将沉淀悬浮于预冷的PBS中洗涤；(9)将上述外泌体悬液离心，得到纯化外泌体；(10)将外泌体沉淀重悬于预冷的PBS中得到外泌体悬液。该方法可高效地从小鼠睾丸组织培养上清液中提取到高浓度、高纯度的外泌体。
一种小鼠睾丸组织外泌体提取方法

[发明专利]一种简便的外泌体提取方法-CN202011427150.2在审
发明人：陈小华;姚婷;陈金梅;张毅;臧国庆 -专利权人：上海市第六人民医院
申请日： 2020-12-09 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： C12N5/0784 文献下载
摘要：本发明公开了一种简便的外泌体提取方法，包括以下步骤：(1)收集外泌体细胞上清液；(2)通过离心去除上清液中的细胞碎片；(3)将去除细胞碎片的上清液转移到超滤管中，使用超滤管富集外泌体；(4)使用PBS对超滤管中富集的外泌体进行洗涤；(5)对洗涤后的外泌体进行盐析，得到相对纯化的外泌体；(6)测定纯化后外泌体的浓度。该方法利用滤过膜截流外泌体，再通过盐析析出大分子量蛋白，解决了外泌体提取困难的问题：该方法可操作性强，真正解决了外泌体提取试剂昂贵、耗时、提取设备要求高、产物纯度不高等问题。因此，使用本发明所述提取方法大大简化了外泌体的提取方法、提高了外泌体的提取质量和提取效率。
一种简便外泌体提取方法

[发明专利]一种分离尿液中外泌体的方法-CN201610117071.9在审
发明人：李辉辉;王家亮;刘月星;叶晓飞;俞京仁 -专利权人：上海润腾生物科技有限公司
申请日： 2016-03-02 - 公布日： 2017-09-12 - 主分类号： G01N1/40 文献下载
摘要：本发明提供一种简单快速高效的尿液外泌体分离的方法，该方法包括S1.收集尿液，离心，保留上清液（SN1）；S2.使用二硫苏糖醇处理底部沉淀；S3. 处理后的混合液经离心获得上清（SN2），与第一次得到的上清SN1混合；S4.将特定体积的商业化外泌体沉淀试剂加入到总的上清液中（SN1+SN2），混匀后在4℃孵育至少12个小时；S5. 将上清与外泌体沉淀试剂混合液离心，在管底得到可见的外泌体沉淀；S6. 加入磷酸盐缓冲液重悬外泌体沉淀。与其他尿液外泌体分离的方法相比，该方法能够从尿液中获得最大数量的外泌体颗粒，同样也能产生较高数量及更优质量的外泌体miRNA或mRNA。
一种分离尿液中外方法

[发明专利]一种特异性的间充质干细胞外泌体提取方法-CN201810977632.1在审
发明人：魏志璋;黃馨萍 -专利权人：深圳市浊安认证生物技术有限公司
申请日： 2018-08-24 - 公布日： 2018-12-28 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种特异性的间充质干细胞外泌体提取方法，所述的方法包括如下步骤：无血清的间充质干细胞的上清液的收集：首先进行间充质干细胞的培养，更换培养基培养，离心，去除细胞碎片，得到初始上清液；取所述初始上清液在进一步梯度离心，将所述离心后的上清液转移到无菌离心管中，离心，收集到含有微囊泡的上清液；将含有微囊泡的上清液离心，得到含有外泌体的沉淀，清洗，然后再离心，得到外泌体沉淀；将得到的外泌体沉淀，加入无菌PBS，过滤，得到所述的特异性的间充质干细胞外泌体本发明收集的外泌体采用过滤膜过滤，可以确保提取的外泌体为纳米级；同时降低并优化了转速，减少了高速的机械损伤，分离效率高，成本低。
上清液间充质干细胞沉淀种特异性微囊泡过滤培养基培养无菌离心管分离效率机械损伤梯度离心细胞碎片无菌PBS 过滤膜纳米级无血清去除清洗优化

[发明专利]Annexin V-FITC外泌体捕获亲和磁珠、其制备方法及利用其提取外泌体的方法-CN201910772517.5有效
发明人：刘宏民;郑一超;范琦琦;赵丽娟;李迎迎 -专利权人：郑州大学
申请日： 2019-08-21 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明提供一种Annexin V‑FITC外泌体捕获亲和磁珠、其制备方法及提取方法，主要包括以下步骤：(1)表达和纯化Annexin V，制备Annexin V‑FITC，构建Annexin V‑FITC外泌体捕获亲和磁珠；(2)细胞培养上清液分离与浓缩：细胞培养后分离出细胞培养上清液，并经浓缩处理；(3)外泌体提取：将步骤(2)所得细胞培养上清液与外泌体捕获亲和磁珠共孵育，得到亲和磁珠‑外泌体复合物；(4)外泌体洗脱，将得到的亲和磁珠‑外泌体复合物与洗脱液共孵育，收集洗脱液，即为所提取分离的外泌体产物。本发明所述外泌体捕获亲和磁珠可重复使用，提取方便，且提取得到的外泌体纯度高。
annexin fitc 外泌体捕获亲和制备方法利用提取

[发明专利]一种基于改良聚乙二醇沉淀法分离外泌体的方法-CN202010064906.5有效
发明人：王程;董鸣;张弓 -专利权人：承启医学（深圳）科技有限公司
申请日： 2020-03-23 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供一种基于改良聚乙二醇沉淀法分离外泌体的方法，包括以下步骤：（1）将目标液体样本进行离心沉淀，收集沉淀和上清S1；（2）将步骤（1）里的沉淀重悬于分离液，混匀，加入DTT；（3）将步骤（2）得到的液体孵育混匀；（4）在步骤（3）得到的液体中加入分离液后混匀，再次离心收集上清S2；（5）将上清S1与上清S2进行混合，加入沉淀液混匀后0~10℃放置；（6）高速离心配合低速离心，去除上清，得到外泌体。本发明所述的外泌体分离方法，减少了现有技术分离外泌体时存在的非外泌体蛋白和其他杂质的共沉淀污染，外泌体的纯度和产量大幅地提高。
一种基于改良聚乙二醇沉淀分离外泌体方法

[发明专利]胆管癌胆汁外泌体的提取方法-CN202110591360.3在审
发明人：卢炯;李蓓;程南生 -专利权人：四川大学华西医院
申请日： 2021-05-28 - 公布日： 2021-09-17 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了胆管癌胆汁外泌体的提取方法，包括步骤一：标本的采集；步骤二：外泌体的提取：离心前一天，胆汁标本从冰箱取出置于4度冰箱融化，得到50ml黄色胆汁；胆汁以4°、300g、5min离心1次，然后取上清液；上清以4°、2000g、10min离心1次，然后取上清；得到的50mL上清液稀释至60mL，以4°、12500g、离心30min，离心结束后取上清液；得到的胆汁上清液稀释至70mL，过0.22um筛子后，以4°、120000g、离心2h，得到底部沉淀，将该沉淀用无菌D‑PBS反复吹打溶解后转移至EP管中，共得到200uL外泌体悬液，NTA检测后置于‑80°冰箱中保存；步骤三：外泌体的鉴定。通过标本的采集、外泌体的提取、外泌体的鉴定，进而能够实现对胆管癌胆汁外泌体的提取，在临床诊疗中有巨大的潜在应用价值。
胆管癌胆汁外泌体提取方法

[发明专利]一种iPSC来源干细胞外泌体制备方法及其应用-CN202110299793.1在审
发明人：徐国彤;吴冬梅;林峰;周宁;李淑亭 -专利权人：奥德干细胞再生医学研究中心股份公司
申请日： 2021-03-22 - 公布日： 2021-06-29 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明属于干细胞外泌体技术领域，具体为一种iPSC来源干细胞外泌体制备方法，该iPSC来源干细胞外泌体制备方法的具体步骤如下：S1：干细胞培养：获取干细胞组织，并对干细胞组织分割为小粒状，将小粒状的干细胞组织置于不含外泌体血清的培养基中培养；S2：多级离心获取上清：将步骤S1中培养基上层及培养后的小粒状的干细胞组织稀释，将稀释液置于离心机中2‑4次离心，且每次离心获取上清液；S3：对上清分离过滤获取外泌体：将步骤S2中最终获取的上清液通过分离得到外泌体；S4：纯化外泌体。通过多级离心处理，获取的外泌体纯度较高；通过纯化外泌体的操作，使得外泌体的纯度进一步提高；制备步骤简单，效率较高。
一种 ipsc 来源干细胞体制方法及其应用

[发明专利]一种永生化间充质干细胞的构建方法及制备外泌体的方法-CN202110062621.2有效
发明人：夏玉龙;吴炯 -专利权人：苏州恒康生命科学有限公司
申请日： 2021-01-18 - 公布日： 2023-08-18 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本申请涉及间充质干细胞培养领域，具体公开了一种永生化间充质干细胞的构建方法及制备外泌体的方法。制备外泌体的方法包括：永生化间充质干细胞培养；分离纯化：收集上清液，离心，去除细胞碎片，收集上清液，过滤；再次离心，弃上清液，重悬外泌体沉淀，得外泌体重悬液；将外泌体重悬液离心，弃上清液，即得外泌体。本申请的永生化间充质干细胞的构建方法能够构建出永生化并且大量分泌外泌体的间充质干细胞，不需要大规模的培养细胞就能够获得大量的外泌体，一定程度上可降低细胞培养成本。
一种永生化间充质干细胞构建方法制备外泌体

[发明专利]外泌体的提取方法-CN201811373858.7在审
发明人：廉翠红;朱艳霞;张远远 -专利权人：深圳市第二人民医院
申请日： 2018-11-19 - 公布日： 2019-03-29 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种外泌体的提取方法。该方法包括如下步骤：用含无外泌体血清的培养基培养人脂肪来源间充质干细胞，得到培养上清液，所述培养上清液中含有外泌体；将所述培养上清液进行第一离心处理后，取上清进行第二离心处理，然后取上清得到离心液；将所述离心液用100KD超滤管进行超滤浓缩处理，得到超滤液；将所述超滤液进行第三离心处理后，用0.22μm过滤器进行过滤除菌处理，得到浓缩液；将所述浓缩液进行第四离心处理，弃上清得到所述外泌体。该方法可高效地从人脂肪来源间充质干细培养上清液中提取到高浓度、高纯度的外泌体。
培养上清液离心处理脂肪来源超滤液离心液浓缩液间充质干细胞生物技术领域过滤器培养基培养超滤浓缩过滤除菌超滤管高纯度间充质血清

[发明专利]一种干细胞外泌体生产护眼液的加工方法-CN202010937574.7在审
发明人：毛文哲;陈清法;都兴洋 -专利权人：中科博研生物科技（广州）有限公司
申请日： 2020-09-09 - 公布日： 2020-12-04 - 主分类号： A61K38/39 文献下载
摘要：本发明公开了一种干细胞外泌体生产护眼液的加工方法，采用含血清培养基培养人脂肪来源间充质干细胞，得到培养上清液，且培养上清液中含有外泌体；将培养上清液进行一次离心处理后，取上清进行二次离心处理，然后取上清得到离心液；将离心液用超滤管进行超滤浓缩处理，得到超滤液；将离心后的上清液转移到离心管中，在10000g离心30min，收集到含有微囊泡的上清液，得到含有外泌体的沉淀。本发明通过采用离心的方式对上清液进行处理，而且通过多级离心方式进行加工，得到的浓缩液浓度较高，离心处理后的上清液质量更加稳定，活性较高，有效的减少外泌体的机械性损伤，更好地保留外泌体的活性，进一步的提高了该护眼液的使用质量
一种干细胞外泌体生产护眼加工方法

[发明专利]动物脐带间充质干细胞外泌体提取方法-CN202210296704.2在审
发明人：杨桂花;杨海霞;赵进军 -专利权人：和携科技有限公司
申请日： 2022-03-24 - 公布日： 2022-06-07 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本申请具体公开了一种动物脐带间充质干细胞外泌体提取方法。动物脐带间充质干细胞外泌体提取方法包括以下步骤：取动物脐带组织并对脐带间充质干细胞进行培养；外泌体的提取：使用完全培养基培养P3～P20代脐带间充质干细胞，收集上清液，对上清液进行离心去除死细胞和细胞碎片，过滤去除微粒，然后对上清液使用离心法沉淀外泌体；对外泌体沉淀使用PBS重悬后置于‑70～‑80℃环境下保存。本申请的提取方法具有操作简便，外泌体产量高的优点。
动物脐带间充质干细胞外泌体提取方法

[发明专利]间充质干细胞上清液中外泌体常温保存保护剂的制备方法-CN202211072589.7在审
发明人：王嘉祥;张寒冰;王宏科;郭红斌;张鹏 -专利权人：王嘉祥
申请日： 2022-09-02 - 公布日： 2022-11-29 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明涉及生物与新医药技术领域，尤其涉及间充质干细胞上清液中外泌体常温保存保护剂的制备方法。保护剂的活性成分包括甘油、维生素B、海藻糖和干细胞培养上清液。干细胞培养上清液来源与人源脐带间充质干细胞。本发明将甘油、维生素B、海藻糖、干细胞培养上清液按比例混合。使干细胞外泌体可以在常温(18℃‑26℃)、无菌等环境下存放一年以上，且保持其结构稳定。大大提高了外泌体的保存时间，降低了外泌体的结构降解风险，放宽了外泌体对保存和运输温度的限制，使干细胞外泌体大范围的商业化应用成为可能。
间充质干细胞上清液中外常温保存保护制备方法

[发明专利]一种细胞外泌体的提取方法-CN201710810251.X在审
发明人：杨前;刁波;王刚;袁紫林;陈力 -专利权人：江苏国立生物研究院有限公司
申请日： 2017-09-11 - 公布日： 2018-11-23 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞外泌体的提取方法，包括以下步骤：（1）上清液分离：将细胞培养后的培养基，离心去除杂质，分离出培养上清液；（2）一次提取：将步骤（1）所述培养上清液与外泌体提取液混合后进行孵育，孵育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；（3）二次提取：将步骤（2）所述含外泌体的浓缩液加入无菌PBS溶解后加入外泌体提取液进行孵育，孵育后得第二孵化液，将第二孵化液进行离心收集底部沉淀，得细胞外泌体本发明有效地提高细胞外泌体的纯度，降低其杂蛋白含量。
孵化液孵育细胞培养上清液浓缩液细胞培养离心去除杂质上清液分离提取液混合二次提取离心浓缩离心收集培养基无菌PBS 提取液有效地杂蛋白沉淀溶解

[发明专利]干细胞外泌体成分面膜及其制备工艺-CN202110419485.8在审
发明人：石筱强 -专利权人：石筱强
申请日： 2021-04-19 - 公布日： 2021-07-06 - 主分类号： A61K8/99 文献下载
摘要：本发明涉及面膜制备技术领域，更具体的说是干细胞外泌体成分面膜及其制备工艺，该干细胞外泌体成分面膜包括以下重量组分的原料：干细胞外泌体上清液1‑2份、川穹4‑8份、紫草5‑10份、白芨3‑6份和水10‑15份，干细胞外泌体成分面膜制备工艺，包括以下步骤：I、对干细胞外泌体进行无血清培养，提取上清液；II、将其他原材料进行粉碎处理；III、将步骤I提取的上清液、步骤II粉碎的多种原材料进而水混合在一起；IV、对步骤III所得的液体进行搅拌处理，完成干细胞外泌体面膜的加工，所述干细胞外泌体成分面膜制备工艺还使用干细胞外泌体成分面膜制备装置，所述干细胞外泌体成分面膜制备装置包括提取碗和承托构件，提取碗连接在承托构件上
干细胞外泌体成分面膜及其制备工艺

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