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[发明专利]重组猪圆环病毒2型Cap抗原的制备方法-CN201010618223.6无效
发明人：黄毓茂;刘娜;吴锋;刘德辉 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2010-12-31 - 公布日： 2011-07-20 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组猪圆环病毒2型Cap抗原的制备方法，是采用酵母表达系统，先扩增PCV2-ORF2基因，然后构建表达工程菌，即将扩增序列插入酵母表达载体，形成重组表达载体，线性化后转化毕赤酵母宿主细胞，构建表达工程菌，最后重组酵母菌分泌表达，得到重组猪圆环病毒2型Cap抗原蛋白。酵母表达系统对表达的蛋白有加工折叠和翻译后修饰的功能，从而使表达的蛋白具有生物活性，比起大肠杆菌更有优势，但比哺乳动物细胞表达系统操作更简便。而与酿酒酵母相比，毕赤酵母不易过度糖基化，因此分离纯化步骤简单。采用酵母表达系统操作简单、表达量较高，生产成本低，可以进行大规模生产，有利于猪圆环病毒亚单位疫苗的推广使用。
重组圆环病毒 cap 抗原制备方法

[发明专利]VZV糖蛋白在毕赤酵母中的表达方法及其应用-CN201810151770.4在审
发明人：肖杨;王雨;高媛;刘昊智;毛普加;幕婷;李津;吴克 -专利权人：武汉博沃生物科技有限公司
申请日： 2018-02-14 - 公布日： 2018-08-10 - 主分类号： C07K14/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种VZV糖蛋白在毕赤酵母中的表达方法及其应用，包括：构建表达载体，筛选阳性转化子，线性化酵母表达载体，制备酵母电转化感受态、重组子的鉴定、重组酵母的表达和目标蛋白鉴定。本发明公开的表达方法能够成功表达水痘‑带状疱疹病毒的糖蛋白E，且所得蛋白免疫原性好，且该毕赤酵母可高效且稳定表达。
毕赤酵母糖蛋白带状疱疹病毒构建表达载体酵母表达载体蛋白免疫原阳性转化子水痘目标蛋白稳定表达重组酵母糖蛋白E 电转化感受态线性化重组子酵母制备应用筛选成功

[发明专利]一种重组酵母菌及其制备方法-CN201010131757.6有效
发明人：邱并生;牛振东;宋浩雷 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2010-03-23 - 公布日： 2010-08-25 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组酵母菌及其制备方法。该方法包括如下步骤：(1)将表达载体I转入宿主酵母菌中，得到转入所述表达载体I的重组酵母菌，记作酵母菌A；(2)将表达载体II转入所述酵母菌A中，得到转入所述表达载体I和所述表达载体II的重组酵母菌；将所述转入所述表达载体I和所述表达载体II的重组酵母菌记作酵母菌B。实验证明，用本发明方法制备得到的重组酵母菌中不携带任何抗性基因；转入的表达载体拷贝数多，可达5-50个拷贝，且均整合到宿主菌的基因组中；用本发明的重组菌表达的外源基因产品成为安全的食品级产品。因此，本发明的重组酵母菌及其制备方法适于推广使用。
一种重组酵母菌及其制备方法

[发明专利]野生型和突变体hFⅨ毕赤酵母表达载体及构建方法和应用-CN201110435501.9无效
发明人：张同存;周俊;王震宇;戴永刚;成彩莲;唐文心 -专利权人：武汉科技大学
申请日： 2011-12-22 - 公布日： 2013-06-26 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种野生型和三种突变体hFⅨ在毕赤酵母中的表达载体的构建方法及应用，其步骤：根据Genebank提供的基因序列，用RT-PCR技术从健康人肝脏中克隆出hFⅨ全长cDNA序列，构建用于毕赤酵母表达的融合了酵母α-factor信号肽和全长hFⅨ序列的酵母表达质粒pPIC9K-hFⅨ，将该质粒转入毕赤酵母SMD1168中，筛选出高表达的酵母菌株。继而构建酵母表达质粒pPICZA-hFⅨ，在此基础上设计并构建三种酵母菌hFⅨ高活性突变体，电转入毕赤酵母SMD1168中，筛选出高表达的酵母菌突变株。得到的各种hFⅨ酵母表达载体凝血活性均高于标准hFⅨ。野生型hFIX(pPIC9K-hFⅨ)经50L中试发酵研究，蛋白纯化产物分泌表达量最高可达558mg/L，纯度和凝血活性均较高。
野生型突变体 hf 酵母表达载体构建方法应用

[发明专利]一种表达结核杆菌抗原的重组酿酒酵母及其制备方法-CN200910247317.4无效
发明人：刘建平;李育阳;江佳稀;俞静 -专利权人：复旦大学
申请日： 2009-12-28 - 公布日： 2011-06-29 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了一种表达结核杆菌抗原的重组酿酒酵母，该酿酒酵母菌株含有如下表达载体：该表达载体含有酵母2μ质粒完整序列、酵母营养缺陷筛选基因、酵母启动子、酵母终止子和结核杆菌抗原基因。该表达质粒中，除需表达的结核杆菌抗原基因序列外，没有非酵母基因序列，只能够在酿酒酵母细胞内生存，不会转移。本发明所产生的酿酒酵母表达质粒充分发挥了酿酒酵母食品级微生物的优势，安全、高效；而且，酵母细胞自身具有很强的免疫佐剂效应，不需添加佐剂；可以作为制备结核病防治疫苗的优良材料。
一种表达结核杆菌抗原重组酿酒酵母及其制备方法

[发明专利]适于在酵母中表达的重组甜蛋白及其制备方法-CN200410072327.6无效
发明人：路福平;陈忠军;杜连祥;戚薇;王敏;黎明;蔡恒 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2004-10-14 - 公布日： 2005-04-06 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：适于在酵母中表达的重组甜蛋白及其制备方法，属于用重组DNA技术表达植物甜蛋白，特别是用酿酒酵母表达重组甜蛋白的方法。本发明解决了基因工程表达重组甜蛋白Monellin效率不理想的问题。其技术方案是采用酵母偏爱密码子，用PCR方法合成甜蛋白基因，并在酿酒酵母中高效表达植物甜蛋白。包含该序列的重组表达载体以及携带该载体的重组体细胞。其中酵母可以是酿酒酵母、假丝酵母、克鲁维酵母、雅鲁瓦酵母等。选用酿酒酵母作为宿主，安全性好，更利于甜蛋白这种食用添加剂的大量生产，产量可达24g/L发酵液，为工业化大生产奠定了基础。
适于酵母表达重组蛋白及其制备方法

[发明专利]杂交酵母流感疫苗-CN200510097795.3无效
发明人：孙娟 -专利权人：孙娟
申请日： 2005-08-30 - 公布日： 2007-03-07 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：该杂交酵母流感疫苗由基因重组杂交酵母组成。流感疫苗由两个分别表达不同目的基因的酵母质粒组成，其中一个酵母质粒表达细胞因子，另一个酵母质粒表达流感病毒抗原基因；经这两个质粒分别转化为单倍体酵母，通过酵母杂交技术将这两个单倍体酵母转化为含有分别表达不同目的基因的杂交酵母，由此产生的重组杂交酵母流感疫苗是一种具有治疗和预防流感作用的疫苗。
杂交酵母流感疫苗

[发明专利]表达外源蛋白的毕赤酵母、其构建方法及其诱导表达方法-CN201610613088.3在审
发明人：杨艳坤;战春君;张震阳;白仲虎;刘秀霞;戴晓峰;詹锦玲 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-07-29 - 公布日： 2017-05-24 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明提供了表达外源蛋白的毕赤酵母菌株及表达系统，该毕赤酵母菌株的GTP1基因发生突变，突变后的毕赤酵母基因不能编码甘油转运蛋白或编码的甘油转运蛋白没有活性，能够在甘油存在条件下启动PAOX1的转录，从而提高毕赤酵母在甘油存在条件下AOX1的表达量，从而提高外源蛋白的表达量。同时，本发明还提供了所述表达外源蛋白的毕赤酵母的构建方法，所述表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法，该诱导表达方法能够有效提高外源蛋白表达量及最终细胞浓度。
表达蛋白酵母构建方法及其诱导

[发明专利]表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法-CN201610623309.5有效
发明人：杨艳坤;张震阳;战春君;白仲虎;刘秀霞;戴晓峰;詹锦玲 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-07-29 - 公布日： 2019-11-22 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了表达外源蛋白的毕赤酵母菌株及表达系统，该毕赤酵母菌株的GTPI基因发生突变，突变后的毕赤酵母基因不能编码甘油转运蛋白或编码的甘油转运蛋白没有活性，能够在甘油诱导条件下启动PAOX1的转录，从而提高毕赤酵母在甘油诱导条件下AOX1的表达量，从而提高外源蛋白的表达量。同时，本发明还提供了所述表达外源蛋白的毕赤酵母的构建方法，所述表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法，该诱导表达方法能够有效提高外源蛋白表达量及最终细胞浓度。
表达蛋白酵母构建方法及其诱导

[发明专利]重组鲫鱼MBSP表达菌株及其构建方法-CN201210333208.6有效
发明人：杜翠红;曹敏杰;韩龙 -专利权人：集美大学
申请日： 2012-09-11 - 公布日： 2012-12-19 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明提供一种重组鲫鱼MBSP表达菌株，所述表达菌株以巴斯德毕赤酵母GS115为宿主菌，并含有重组酵母表达载体pPIC9K-MBSP；且该重组酵母表达载体pPIC9K-MBSP通过将鲫鱼MBSP基因插入酵母表达载体pPIC9K中构建；并提供了该重组鲫鱼MBSP表达菌株的构建方法。本发明所构建的表达菌株可分泌表达重组鲫鱼MBSP，且具有表达量高、构建工艺简单、生产成本较低的优点。
重组鲫鱼 mbsp 表达菌株及其构建方法

[发明专利]一种具有防御素功能的粟酒裂殖酵母工程菌及其构建方法-CN200710055954.2无效
发明人：王丕武;王俊玲;付永平 -专利权人：吉林农业大学
申请日： 2007-08-03 - 公布日： 2008-04-09 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明提供了一种具有防御素功能的粟酒裂殖酵母工程菌及其构建方法。本发明所提供的粟酒裂殖酵母工程菌，是将含有防御素基因的重组粟酒裂殖酵母表达载体导入粟酒裂殖酵母中获得的。本发明将防御素基因插入到粟酒裂殖酵母表达载体的多克隆位点处，将构建的粟酒裂殖酵母表达载体导入粟酒裂殖酵母中获得重组粟酒裂殖酵母，培养重组粟酒裂殖酵母使防御素基因得到表达。本发明弥补了传统防御素制备方法以及原核表达系统、酿酒酵母和毕赤酵母表达系统的不足。发明应用于工业化防御素的生产时，具有生产规模大，防御素活性高，杀菌能力强，生长周期短，提取成本低的优点。
一种具有防御功能粟酒裂殖酵母工程及其构建方法

[发明专利]一种共表达CYP和CPR的酵母系统-CN200510047406.6无效
发明人：杨凌;程婕 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2005-10-14 - 公布日： 2007-04-18 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于体外药物代谢性质评价的药物代谢酶异源表达系统，具体的说一种共表达CYP和CPR的酵母表达系统，分别带有CPR的DNA片段和CYP的DNA片段的酵母表达载体转导酵母细胞中，这两个表达载体分别以整合型和游离型的方式在酵母细胞中表达，重组的酵母细胞经发酵诱导，得到的酵母细胞制备物即为目的表达系统，其可应用于CYP酶系体外药物代谢性质的评价。所构建成新的酿酒酵母共表达系统可广泛地应用于氧化还原酶体系如细胞色素P450酶系，后者被广泛地应用于涉及ADME/T和药代动力学中药物代谢等的筛选、应用和开发。
一种表达 cyp cpr 酵母系统

[发明专利]灵芝漆酶毕赤酵母基因工程菌株的构建与应用-CN201510876149.0在审
发明人：周选围;徐慧;白晓慧;郭梦圆;高艳华 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2015-12-03 - 公布日： 2016-02-24 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：一种灵芝漆酶毕赤酵母基因工程菌株的构建与应用，通过从灵芝中克隆出漆酶基因GlLac，经EcoRI和XbaI双酶切后克隆入毕赤酵母表达质粒并构建出表达载体，最后将其电转化入毕赤酵母表达宿主菌中，经培养扩增和筛选后得到毕赤酵母工程菌本发明构建了灵芝漆酶(Lac)的酵母分泌型共表达载体pPICZαA-GlLac，并转化毕赤酵母(Pichia pastoris)X33，通过挑选高博莱霉素(Zeocin)抗性的重组子作为毕赤酵母工程菌。毕赤酵母的胞外表达载体pPICZαA是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体，能表达高拷贝的基因。
灵芝漆酶毕赤酵母基因工程菌株构建应用

[发明专利]杂交酵母禽流感疫苗-CN200510097796.8无效
发明人：孙娟 -专利权人：孙娟
申请日： 2005-08-30 - 公布日： 2007-03-07 - 主分类号： A61K48/00 文献下载
摘要：杂交酵母禽流感疫苗由基因重组杂交酵母组成。禽流感疫苗组成为两个分别表达不同目的基因的酵母质粒，其中一个质粒表达细胞因子，另一个质粒表达禽流感抗原基因；经这两个质粒分别转化为单倍体酵母，通过酵母杂交技术将这两个单倍体酵母转化为含有分别表达不同目的基因的杂交酵母，由此产生的重组杂交酵母禽流感疫苗是一种具有治疗和预防禽流感作用的疫苗。
杂交酵母禽流感疫苗

[发明专利]一种产朊假丝酵母游离型表达载体及其构建方法与应用-CN201710509284.0有效
发明人：刘泽寰;林蒋海;傅菁 -专利权人：广东利世康低碳科技有限公司
申请日： 2017-06-28 - 公布日： 2020-08-25 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程领域，公开了一种产朊假丝酵母(Candida utilis,C.utilis)游离型表达载体及其构建方法与应用，该表达载体以毕赤酵母表达型载体pGAPZαA为基本骨架，利用产朊假丝酵母的启动子、酿酒酵母的启动子或毕赤酵母的启动子替换pGAPZαA载体上的GAP启动子，利用G418抗性基因替换pGAPZαA载体上的博来霉素基因，将产朊假丝酵母的自主复制序列插入pGAPZαA载体的PscI位点中本发明的所构建的表达载体分别含有不同启动子，旨在构建适合产朊假丝酵母的表达载体，应用于产朊假丝酵母工程菌高效表达外源蛋白。
一种产朊假丝酵母游离表达载体及其构建方法应用

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