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[发明专利]马克思克鲁维酵母菌及其应用-CN201510540030.6有效
发明人：吕红;周峻岗;余垚;袁汉英;李育阳 -专利权人：复旦大学
申请日： 2015-08-28 - 公布日： 2018-04-03 - 主分类号： C12N1/16 文献下载
摘要：本发明提供了一种马克思克鲁维酵母菌，其保藏号为CGMCC No.10621，本发明还提供了所述马克思克鲁维酵母菌的应用。相比于ATCC8585、ATCC26548等现有克鲁维酵母，本发明马克思克鲁维酵母菌具有更高的分泌蛋白的能力和更高的生物量，可用于生产酶制剂，并且可以用来构建重组蛋白表达系统。
马克思克鲁酵母菌及其应用

[发明专利]在马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株中表达融合了组氨酸标签的外源基因的重组载体-CN201510562498.5在审
发明人：吕红;余垚;袁汉英;周峻岗;李育阳 -专利权人：复旦大学
申请日： 2015-09-07 - 公布日： 2015-12-09 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了一种在马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株中表达融合了组氨酸标签的外源基因的重组载体、及其制备方法和应用，所述重组载体按照顺序包括氨苄抗性基因、PKD1载体序列、菊粉酶启动子、多克隆位点、菊粉酶终止子、营养基因启动子、营养基因开放阅读框；还包括多聚组氨酸标签，所述多聚组氨酸标签位于多克隆位点的C端或N端。本发明构建的重组载体，可用于构建转化子，来实现外源基因的表达。
马克克鲁酵母营养缺陷菌株表达融合组氨酸标签基因重组载体

[发明专利]用于在马克思克鲁维酵母营养缺陷型菌株中进行外源基因分泌表达的重组载体-CN201510562932.X在审
发明人：吕红;余垚;袁汉英;周峻岗;李育阳 -专利权人：复旦大学
申请日： 2015-09-07 - 公布日： 2015-11-18 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于在马克思克鲁维酵母营养缺陷型菌株中进行外源基因分泌表达的重组载体、及其制备方法和应用，所述重组载体按照顺序包括氨苄抗性基因、PKD1载体、菊粉酶启动子、信号肽、多克隆位点、菊粉酶终止子、营养基因启动子、营养基因开放阅读框。本发明构建的用于外源基因分泌表达的重组载体、及其制备方法，可用于构建转化子，来实现外源基因的分泌表达。
用于马克思克鲁酵母营养缺陷菌株进行基因分泌表达重组载体

[发明专利]不含有信号肽的在马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株中进行外源基因表达的重组载体-CN201510562496.6在审
发明人：吕红;余垚;袁汉英;周峻岗;李育阳 -专利权人：复旦大学
申请日： 2015-09-07 - 公布日： 2015-11-18 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了一种不含有信号肽的在马克斯克鲁维酵母营养缺陷型菌株中进行外源基因表达的重组载体、及其制备方法和应用，所述重组载体按照顺序包括氨苄抗性基因、PKD1载体、菊粉酶启动子、多克隆位点、菊粉酶终止子、营养基因启动子、营养基因开放阅读框。本发明构建的不含信号肽的重组载体、及其制备方法，可用于构建转化子，来实现外源基因的表达。
含有信号肽马克克鲁酵母营养缺陷菌株进行基因表达重组载体

[发明专利]一种表达结核杆菌抗原的重组酿酒酵母及其制备方法-CN200910247317.4无效
发明人：刘建平;李育阳;江佳稀;俞静 -专利权人：复旦大学
申请日： 2009-12-28 - 公布日： 2011-06-29 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明属于结核疫苗领域和基因工程领域。本发明提供了一种表达结核杆菌抗原的重组酿酒酵母，该酿酒酵母菌株含有如下表达载体：该表达载体含有酵母2μ质粒完整序列、酵母营养缺陷筛选基因、酵母启动子、酵母终止子和结核杆菌抗原基因。该表达质粒中，除需表达的结核杆菌抗原基因序列外，没有非酵母基因序列，只能够在酿酒酵母细胞内生存，不会转移。本发明所产生的酿酒酵母表达质粒充分发挥了酿酒酵母食品级微生物的优势，安全、高效；而且，酵母细胞自身具有很强的免疫佐剂效应，不需添加佐剂；可以作为制备结核病防治疫苗的优良材料。
一种表达结核杆菌抗原重组酿酒酵母及其制备方法

[发明专利]一种生产高纯度果糖的酿酒酵母系统-CN200910198659.1无效
发明人：刘建平;李育阳;俞静 -专利权人：复旦大学
申请日： 2009-11-11 - 公布日： 2011-05-11 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明属生物基因工程技术领域，提供了一种生产高纯度果糖的酿酒酵母系统。该系统包括酿酒酵母菌株、菊粉酶基因表达盒、HXK1基因敲除盒DNA片段、HXK2基因敲除盒DNA片段和由酵母终止子、酿酒酵母2μ质粒完整序列、酵母营养缺陷筛选基因、酵母启动子序列依次连接构成的酵母-大肠杆菌穿梭质粒的酵母载体部分。利用该系统，能够在菊芋培养基中生长，分泌菊粉酶水解菊粉成为果糖和葡萄糖。在发酵过程中，工程菌仅利用葡萄糖而不消耗果糖，导致果糖在发酵液中积累。利用本发明，能够直接以菊芋原料生产高纯度果糖或者高果糖浆，传统的果糖生产工艺相比，具有工艺简单、成本低、效率高的特点。
一种生产纯度果糖酿酒酵母系统

[发明专利]一种食品级酿酒酵母重组质粒的制备方法-CN200910198660.4无效
发明人：刘建平;李育阳;江佳稀 -专利权人：复旦大学
申请日： 2009-11-11 - 公布日： 2011-05-11 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明属于生物基因工程技术领域，提供了一种食品级酿酒酵母重组质粒的制备方法：首先，构建含有酵母2μ质粒完整序列、酵母营养缺陷筛选基因、酵母启动子和酵母终止子的穿梭质粒酵母载体部分；同时，构建含有酵母启动子、酵母终止子和目标外源基因的外源基因表达盒；然后，将穿梭质粒酵母载体部分与外源基因表达盒共转化相应营养缺陷型酿酒酵母菌株，在营养缺陷选择性培养基上筛选培养转化子；最后，分离纯化获得目的酿酒酵母重组质粒。该表达质粒只能够在酿酒酵母细胞内生存，不会转移，可以安全、高效的广泛的用于表达各种外源基因。
一种食品级酿酒酵母重组质粒制备方法

[发明专利]一种提高重组蛋白在克鲁维酵母中表达量的方法-CN200810200344.1无效
发明人：刘建平;李育阳;俞静;袁汉英;蔡显鹏 -专利权人：复旦大学
申请日： 2008-09-23 - 公布日： 2009-03-18 - 主分类号： C12N15/56 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种提高重组蛋白表达水平的技术方案。该方法中，首先将菊粉酶基因的启动子、α-信号肽、目的蛋白和菊粉酶基因的终止子编码序列依次连接；然后将上述序列插入克鲁维酵母表达载体；最后转化克鲁维酵母，发酵，取发酵上清液分离即得。本发明的方法可以促进克鲁维酵母表达重组蛋白的产量显著增长。本发明可用于提高多种蛋白的表达量，为降低生产成本、扩大生产规模提供了新的方法。
一种提高重组蛋白克鲁酵母表达方法

[发明专利]一种利用菊芋原料糖化和发酵同步进行生产乙醇的方法-CN200810037117.1无效
发明人：刘建平;李育阳;俞静;江佳稀 -专利权人：复旦大学
申请日： 2008-05-08 - 公布日： 2008-09-17 - 主分类号： C12P7/06 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体为一种利用菊芋原料生产乙醇的方法。该方法包括，原料处理：鲜菊芋清洗干净，榨汁，或切片，烘干，磨粉；种子液制备：克鲁维酵母在以菊芋粉或菊芋汁为完全组分的种子培养液中培养；发酵：全菊芋汁或全菊芋粉配制的培养基中接入种子液，厌氧发酵生产乙醇，最后蒸馏获得乙醇。本发明中种子培养基和发酵培养基成分均为菊芋汁或菊芋粉，不需添加任何辅助成分，而且发酵培养基中的菊芋原料不需预先糖化处理，利用种子液中克鲁维酵母所分泌产生的菊粉酶直接水解糖化菊芋原料中的多聚果糖，并同时进行发酵，产物乙醇浓度达到12％(v/v)。本发明方法简单，实现糖化与发酵同步进行，降低了生产成本。
一种利用菊芋原料糖化发酵同步进行生产乙醇方法

[发明专利]一种新的表达酶的酵母基因工程系统-CN200710046171.8无效
发明人： 李育阳;袁汉英;蔡显鹏;张晋;文铁桥 -专利权人：复旦大学
申请日： 2007-09-20 - 公布日： 2008-04-09 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明属生物基因工程技术领域，具体为一种表达酶的酵母基因工程系统。具体内容包括：构建由鹰嘴豆克鲁维酵母转录启动子、终止子及带信号肽的菊粉酶基因组成的表达盒，并将其插入载体pUKD－S，建成了高稳定的菊粉酶基因表达质粒；将该表达质粒导入鹰嘴豆克鲁维酵母宿主Y179ura3^－，建成能高效分泌表达菊粉酶的基因工程菌；用将建成的鹰嘴豆克鲁维酵母基因工程菌生产菊粉酶。本发明也可以用来表达和生产其他内源的和外源的、天然的和改构的酶。
一种表达酵母基因工程系统

[发明专利]一种含有菊粉外切酶基因序列的基因工程菌株及其用于制备菊粉外切酶的方法-CN200710040392.4有效
发明人：吕红;李育阳;袁汉英 -专利权人：复旦大学
申请日： 2007-04-30 - 公布日： 2007-10-31 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明属于遗传工程和发酵工程领域。本发明将菊粉外切酶基因克隆到真核表达载体pUKDS上，并转化鹰嘴豆克鲁维酵母Y179U，形成表达菊粉外切酶的克鲁维酵母基因工程菌株。发酵时，取上述基因工程菌株在常温常压下发酵2－8天，然后去除菌体，即得；发酵液初始菌浓度为OD₆₀₀＝0.2－1.6；发酵液pH值为5.5－8.0；发酵液中含有0.5－2％的酵母粉和浓度不低于2％的碳源。用本发明的方法生产的菊粉外切酶，活性可达2500u/ml以上，发酵产量高，发酵周期短，发酵成本低，适用于推广至大规模工业化生产。
一种含有菊粉外切基因序列基因工程菌株及其用于制备方法

[发明专利]基于体内同源重组的构建遗传工程生物体的方法-CN02136302.1无效
发明人： 李育阳;陈向岭;何炜;袁汉英;霍克克 -专利权人：复旦大学
申请日： 2002-07-30 - 公布日： 2004-08-18 - 主分类号： C12N15/67 文献下载
摘要：本发明提供了一种将所需要的、两端带有载体片段同源序列的线性化外源基因表达单元与线性化的特定表达载体共转化特定生物体，通过体内同源重组构建遗传工程生物体的方法，以及用该方法获得的遗传工程生物体及其用途。
基于体内同源重组构建遗传工程生物体方法

[发明专利]鹰嘴豆克鲁维酵母表达系统及其用途-CN02137040.0无效
发明人： 李育阳;张晋;徐帆洪;文铁桥;邸玉君;霍克克 -专利权人：复旦大学
申请日： 2002-09-18 - 公布日： 2003-04-09 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明提供了可用基因工程宿主菌的营养缺陷型鹰嘴豆克鲁维酵母，利用该菌株的URA3基因构建的多核苷酸载体，将外源基因转入宿主菌的化学与电转化方法，以及所获得的带有特定外源基因的基因工程鹰嘴豆克鲁维酵母菌株。
鹰嘴豆克鲁酵母表达系统及其用途

[发明专利]一种高效纯化基因工程菌重组表达产物的工艺及其用途-CN02136296.3无效
发明人： 李育阳;高卜渝 -专利权人：复旦大学
申请日： 2002-07-30 - 公布日： 2003-04-09 - 主分类号： C12N15/67 文献下载
摘要：本发明提供了一种高效纯化基因工程重组表达产物的方法及其试剂。使用表面活性剂等助溶剂克服重组表达产物的聚合问题，提高纯化效率。使用层析系统和适当的分离纯化条件提高了基因工程重组表达产物的分离效率。
一种高效纯化基因工程重组表达产物工艺及其用途

[发明专利]一种生产基因工程重组人溶菌酶的方法-CN00110463.2无效
发明人：张福琴;安米;安献禄;张华;贾向志;董辉;马文煜;李元;李育阳;袁汉英 -专利权人：长春奇龙生物技术研究所
申请日： 2000-05-26 - 公布日： 2001-12-12 - 主分类号： C12N9/24 文献下载
摘要：一种生产基因工程重组人溶菌酶的方法,是运用分子生物学技术和基因工程技术,将人溶菌酶基因克隆入酵母菌体内进行表达,然后通过提取、纯化制出人溶菌酶。本发明由于利用基因工程重组技术,发酵生产人溶菌酶,能够较大批量生产人溶菌酶,又避免了从组织中提取易受病源污染的问题,其产品具有稳定、纯净的特点。
一种生产基因工程重组人溶菌酶方法

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