本发明提供一种亚胺还原酶突变体及其制备方法和在催化制备右美沙芬中间体的应用，所述亚胺还原酶突变体为发生了氨基酸突变的亚胺还原酶，所述亚胺还原酶包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述氨基酸突变的类型包括本发明通过在亚胺还原酶中引入突变，显著提高了酶的活性以及立体选择性，能够在温和条件下高收率反应合成右美沙芬中间体(S)‑1‑(4‑甲氧基苄基)‑1,2,3,4,5,6,7,8‑八氢异喹啉，大大降低了生产成本
本发明涉及一种重组蛋白，具体涉及一种重组酮还原酶及在制备R‑3‑羟基丁酸及其盐中的应用。所述的重组酮还原酶，包含：(1)如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，其中，第176位氨基酸、191位氨基酸和第195位氨基酸中的至少1个相当的氨基酸残基被取代；或者(2)如(1)所述的氨基酸序列，其中位点176、191、195之外的一个或更多个氨基酸被取代，缺失，添加和/或插入；且与野生型酮还原酶相比，该重组酮还原酶的酶活力提高。上述重组酮还原酶对乙酰乙酸乙酯底物的活力较野生型提高至少300％，其中，CmCR‑186突变体对乙酰乙酸乙酯底物的活力较野生型提高了879％。
本发明公开了一种酮酸还原酶在合成手性芳香2‑羟酸中的应用，所述酮酸还原酶氨基酸序列为SEQ ID NO.10所示；本发明提供一种来源于乳酸明串珠菌的高效酮酸还原酶，其能够催化广谱芳香族2‑酮酸，且以苯乙酮酸为底物的底物装载量由利用酮酸还原酶、2‑羟酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶建立的单菌双质粒三酶串联氧化还原级联体系，能够催化大多数外消旋芳香2‑羟酸高效去消旋化为手性芳香(R)‑2‑羟酸，收率和e.e.值均大于99％。
本发明公开了一种酮酸还原酶、基因、工程菌及在合成手性芳香2‑羟酸中的应用，所述酮酸还原酶氨基酸序列为SEQ ID NO.8所示；本发明提供一种来源于乳酸明串珠菌的高效酮酸还原酶，其能够催化广谱芳香族2‑利用酮酸还原酶、2‑羟酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶建立的单菌双质粒三酶串联氧化还原级联体系，能够催化大多数外消旋芳香2‑羟酸高效去消旋化为手性芳香(R)‑2‑羟酸，收率和e.e.值均大于99％。
