本发明涉及一种可以在毕赤酵母高效分泌的单加氧酶突变体及应用，该单加氧酶突变体是将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列自N端第1位至X位氨基酸残基替换为SEQ ID No.2所示氨基酸序列第1位至X位氨基酸残基所形成的蛋白质，其中X为125‑135的整数；并在所形成如SEQ ID No.3的氨基酸序列的基础上，对一个或多个氨基酸残基发生突变得到多个性能更佳的单加氧酶突变体。本发明的单加氧酶突变体能在毕赤酵母中高效分泌表达，可直接使用发酵上清液作为酶促反应的催化剂，与大肠杆菌胞内重组表达的单加氧酶相比，本发明的单加氧酶获取简单，蛋白纯度高，避免了常规制备胞内酶的细胞破碎过程，并简化了下游分离提取过程，具有良好的工业应用前景。
本发明涉及羟腈裂解酶突变体及其基因与应用，该羟腈裂解酶突变体是对如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第72位、73位、76位、110位、329位、331位、333位、340位、343位和358位组氨酸中的一个或多个氨基酸残基替换为其他氨基酸残基所形成的新氨基酸序列对应的蛋白质。与野生型羟腈裂解酶相比，本发明所述羟腈裂解酶突变体对2,2‑二甲基‑苯并[1,3]二噁烷6‑甲醛等大位阻底物醛的羟氰化活性和立体选择性均有大幅度提高，所述羟腈裂解酶的突变体尤其适合催化2,2‑二甲基‑苯并[1,3]二噁烷6‑甲醛，高效制备其相应的(R)‑氰醇中间体，可用于合成手性药物(R)‑沙美特罗，因此具有很好的工业合成应用前景。
