本发明公开了一种产气荚膜梭菌α毒素突变体、表达系统、制备方法及应用,提供了一种产气荚膜梭菌α毒素突变体,与野生型产气荚膜梭菌α毒素氨基酸序列相比,所述的产气荚膜梭菌α毒素突变体第56位天冬氨酸突变为丙氨酸,共370个氨基酸残基,所述野生型产气荚膜梭菌α毒素氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,将该突变后的核酸序列整合到质粒载体上形成表达载体,而后将表达载体转化进革兰氏阳性菌中,得到革兰氏阳性菌表达系统该突变体D56A保留了野生型产气荚膜梭菌α毒素的免疫原性,同时其与细胞受体的结合能力下降,大大降低了其在细胞水平和动物体内的毒性。