本发明提供了一种热稳定性提高的脂肪酶突变体及其构建方法。热稳定性提高的脂肪酶突变体由南极假丝酵母脂肪酶B基因出发，运用多轮定点饱和突变而获得；所述南极假丝酵母脂肪酶B具有SEQ ID No：1所示的氨基酸残基序列；所述脂肪酶突变体具有SEQ ID No：2、本发明运用半理性设计的方法，对南极假丝酵母脂肪酶B基因进行多轮定点饱和突变，获取脂肪酶突变体，这些突变体包含氨基酸突变D223G、L278M及它们的组合。以各自的T5015及48℃的半衰期t1/2来表示，脂肪酶突变体的热稳定性得到了提高。具有较高的实际应用价值和广阔的市场前景。
本发明提供了一种热稳定性提高的脂肪氧合酶突变体及其构建方法，其中脂肪氧合酶突变体具有如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6中任一种所示的氨基酸序列；构建方法为首先确定鱼腥藻脂肪氧合酶突变位点，然后以重组质粒为模板，在突变位点处利用NNK代替原有密码子设计简并引物，进行全质粒PCR反应，构建3个定点饱和突变库，然后通过转化大肠杆菌和抗性筛选得到3个饱和突变库；最后对3个饱和突变库进行抗性筛选和诱导突变，通过进一步纯化得到纯的脂肪氧合酶突变体。本发明的脂肪氧合酶突变体的热稳定性获得了提高，具有较高的实际应用价值和广阔的市场前景。
本发明涉及一种谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)菌海藻糖合成酶的突变体，其获得方法是通过定点突变技术对来源于谷氨酸棒杆菌的海藻糖合成酶氨基酸序列的第263位点的苯丙氨酸残基进行定点饱和突变，其获得的方法还包括对含有SEQ ID NO.1、SEQID NO.2、SEQ ID NO.3以及SEQ ID NO.4的氨基酸序列至少80％的同源性的海藻糖合成酶的序列中至少一种氨基酸残基进行饱和突变得到突变后海藻糖合成酶基因表达的海藻糖合成酶的反应动力学发生改变，如酶的比活、最适反应温度和最适pH值等酶学特性发生了改变，这种酶能够提高海藻糖合成酶的转化效率，可以进一步降低海藻糖的生产成本。
鼠李树胶糖‑1‑磷酸醛缩酶及其在催化合成稀有糖D‑山梨糖中的应用，其基因序列为由SEQ ID NO.1编码的野生型L‑鼠李树胶糖‑1‑磷酸醛缩酶分别经过其氨基酸第115、116、148、188或152位饱和定点突变本发明通过对RhaD的氨基酸位点进行定点突变，克服了野生型RhaD催化合成D‑山梨糖没有立体选择性的缺陷，实现了RhaD催化D‑甘油醛为醛受体合成D‑山梨糖时的立体选择性，使得催化反应产物以D‑山梨糖为主，经过突变的RhaD的酶活高。本发明方法制备的定点突变的RhaD制备D‑山梨糖，合成效率高、工艺简单、节约成本、D‑山梨糖立体选择性催化效率最高达到91.7％。
本发明公开了一种NADPH氧化酶突变体及其应用，属于生物酶工程技术领域。所述突变体为在SmNOX的基础上，通过同源建模技术和定点饱和突变技术筛选得到；所述突变体为在氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的NADPH氧化酶进行定点突变得到，所述点突变为T114E、I116F或本发明得到的3种SmNOX酶突变体的单位酶活为4.6～6.0U/mg，较原SmNOX酶提高1.4～1.9倍，可更有效地用于相关的氧化还原反应中，在制药、食品、精细化工、农药等领域有良好的应用前景。
