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[发明专利]一种检测大肠杆菌O157:H7的特异性靶点、引物、检测方法及应用-CN202011284156.9有效
发明人： 别小妹;孔梁宇;陆兆新;胡安妥 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-11-17 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明提供一种检测大肠杆菌O157:H7的特异性靶点、引物、检测方法及应用。本发明的新型靶点，与常规检测靶点相比具有较好的特异性，降低了检测中假阳性的产生；本发明中采用Eva Green第三代饱和荧光染料，该染料具有较高的荧光信号值，提高了检测的灵敏度。同时，该染料即使在高浓度使用时，也为表现出PCR的抑制效果，大幅了检测时熔解曲线的分辨率，进而改善了本发明的检测准确性；检测方法便捷，方便观察，且无需繁琐的电泳操作，检测时间缩短在12h以内；检测过程不涉及抗体，检测成本低，可满足一般实验室的检测需求。
一种检测大肠杆菌 o157 h7 特异性引物方法应用

[发明专利]一种Bacillomycin D高活性菌株及其构建方法和应用-CN202210686953.2有效
发明人： 别小妹;张平;陆兆新 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-06-17 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学和微生物发酵领域，提供一种Bacillomycin D高活性菌株及其构建方法和应用。该菌株构建方法包括如下步骤：同源臂的扩增、目的基因的扩增、融合片段扩增、线性载体扩增、重组整合质粒获得、转化子获得及检测。本发明利用温敏型质粒pKS2介导的同源重组双交换的方法，将Iturin A合成酶操纵子中的硫酯酶结构域IA‑TE替换至Bacillomycin D合成酶系中，获得高活性菌株fmbJ‑IA‑TE，Bacillomycin D产量为野生菌株的1.31倍，对黄曲霉菌的抑制效果也优于野生菌株。
一种 bacillomycin 活性菌株及其构建方法应用

[发明专利]一种大肠杆菌O157:H7可视化快速检测体系及其试剂盒-CN202310222384.0在审
发明人： 别小妹;王祖未;陆兆新 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2023-03-09 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明提供一种大肠杆菌O157:H7可视化快速检测体系及其试剂盒。针对大肠杆菌O157:H7特异性靶基因，使用SYBR Green荧光指示剂进行环介导等温扩增体系的建立并用钙黄绿素作为可视化指示剂代替荧光指示剂，建立了检测大肠杆菌O157:H7的可视化LAMP技术。本发明创造性建立了定量及可视化LAMP检测新技术，可以准确、快速地鉴定出大肠杆菌O157:H7，具备高特异、高灵敏度和抗干扰能力。除此，将建立的可视化LAMP检测体系组装成商品试剂盒，减少检测步骤，提高检测的便捷性，满足现场检测和批量检测的需求。
一种大肠杆菌 o157 h7 可视化快速检测体系及其试剂盒

[发明专利]一种脂肽surfactin在预防或缓解Ⅱ型糖尿病方面的应用-CN202210111873.4有效
发明人：陆兆新;陈晓宇;吕凤霞;别小妹;赵海珍 -专利权人：南京农业大学;南京福斯弗瑞生物科技有限公司
申请日： 2022-01-27 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： A61K38/12 文献下载
摘要：本发明提供了一种脂肽surfactin在预防或缓解Ⅱ型糖尿病方面的应用，属于食品微生物领域。该surfactin来源于保藏编号为CGMCC No:6249的解淀粉芽孢杆菌fmb50(Bacillus amyloliquefaciens fmb50)。其一级结构式为：其中n＝12‑14。该surfactin能够有效降低Ⅱ型糖尿病小鼠的空腹血糖，增加口服葡萄糖耐受，调节肝脏中糖代谢和脂质代谢的平衡；另外，surfactin也具有优化肠道菌群结构的能力，具有良好的益生功能。可以在预防或缓解Ⅱ型糖尿病引起的脂肪肝方面的应用，改善Ⅱ型糖尿病引起的肝脏中的糖代谢紊乱或改善Ⅱ型糖尿病引起的肠道菌群紊乱。
一种 surfactin 预防缓解糖尿病方面应用

[发明专利]具有预防或缓解高尿酸血症的鼠李糖乳杆菌fmb14及应用-CN202210049748.5有效
发明人：陆兆新;赵洪源;吕凤霞;别小妹;赵海珍 -专利权人：南京农业大学;南京福斯弗瑞生物科技有限公司
申请日： 2022-01-17 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一株具有预防或缓解高尿酸血症的鼠李糖乳杆菌fmb14及应用，属于食品微生物领域。从甘肃省张掖市农家自制酸奶中筛选出的鼠李糖乳杆菌fmb14，在模拟胃肠道环境中的存活率达到58.0%，而对肠道细胞的黏附率为50.0%。所述鼠李糖乳杆菌fmb14在体外对肌苷的降解率达到36.4%。灌胃所述鼠李糖乳杆菌fmb14悬液能显著改善高肌苷饮食引起的小鼠尿酸水平增加，将高尿酸模型小鼠血清尿酸水平由179.1μmol/L降低至113.2μmol/L，同时降低小鼠全身炎症程度，修复高尿酸血症引起的肠道菌群紊乱。本发明的鼠李糖乳杆菌fmb14可用于制备预防或缓解高尿酸血症及其相关症状发生的药物，具有非常广泛的应用前景。
具有预防缓解尿酸鼠李糖乳杆菌 fmb14 应用

[发明专利]一株具有缓解肥胖功能的嗜酸乳杆菌NX2-6及应用-CN202210028105.2有效
发明人：陆兆新;唐超;吕凤霞;别小妹;赵海珍;孟凡强;周立邦 -专利权人：南京农业大学;南京福斯弗瑞生物科技有限公司
申请日： 2022-01-11 - 公布日： 2023-06-27 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明提供了本发明涉及一株具有缓解肥胖功能的嗜酸乳杆菌NX2‑6及应用,属于食品微生物领域。该菌株NX2‑6分类命名：嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)，已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC，保藏编号为CGMCC NO.17311。该菌株能够有效降低高脂饮食小鼠的体重、肝脏和脂肪的重量，改善了脂肪组织中脂质代谢，抑制甘油三酯的积累，同时也能够增强脂肪组织中线粒体的功能；并且有效改善了小鼠体内的炎症反应。另外，该菌株也具有优化肠道菌群结构的能力，具有良好的益生功能。可以在缓解高脂饮食引起的肥胖方面应用，或在改善脂肪组织中脂质代谢和能量代谢方面应用。或者是在抑制代谢性炎症、调节肠道菌群结构方面得到应用。
具有缓解肥胖功能酸乳杆菌 nx2 应用

[发明专利]一种提高酸奶黏度和益生活性的方法-CN202211368136.9在审
发明人：孟凡强;陆兆新;别小妹;赵海珍;朱萍 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-11-03 - 公布日： 2023-06-06 - 主分类号： A23C9/123 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高酸奶黏度和益生活性的方法，利用植物乳杆菌发酵酸奶，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌cyaA超量表达菌株。该菌株通过一种新的CRP类似物与cAMP形成复合物激活植物乳杆菌胞外多糖合成，提高植物乳杆菌胞外多糖的产量，增加酸奶黏度。将植物乳杆菌发酵的碳源设定为麦芽糖。本发明通过分析多糖生物合成簇，鉴定与启动子结合的转录调节因子，以阐明了麦芽糖增加EPS产量的调节机制，并将其用于改善酸奶的质地，在不使用或者大大降低使用添加剂的情况下，提高了酸奶的黏度和益生活性，降低了生产成本，简化了生产工艺，提高了发酵乳的安全性。
一种提高酸奶黏度生活方法

[发明专利]一种检测创伤弧菌的特异性靶点、引物、检测方法及应用-CN202211271935.4在审
发明人：杨军;周海波;刘新梅;别小妹;张圣玉;程逸宇 -专利权人：南京市食品药品监督检验院
申请日： 2022-10-18 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测创伤弧菌的特异性靶点、引物、检测方法及应用，属于食品安全检测技术领域。本发明通过建立本地数据库和在线比对的方法筛选得到可用于检测创伤弧菌的新型特异性靶点。利用挖掘出的新靶点结合传统靶点建立双重数字PCR方法，PCR引物探针分别根据自筛靶基因AOT11_08030(vv08030)和传统靶基因vvhA设计而成，为保证方法的特异性和灵敏度，合理优化PCR扩增条件、反应体系。实验结果表明，本发明方法具有特异性强，灵敏度高，结果判定简单的特点；检测过程无需开盖，省去繁琐的电泳操作，检测时间缩短在3h以内，适用于食品中创伤弧菌的快速定量检测。
一种检测创伤弧菌特异性引物方法应用

[发明专利]一种副溶血性弧菌和大肠杆菌O157:H7标准质粒、构建方法及其应用-CN202211527707.9在审
发明人： 别小妹;崔心平;杨军;陆兆新;周海波;胡安妥;孔梁宇;刘新梅 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-12-01 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明公开了一种副溶血性弧菌和大肠杆菌O157：H7标准质粒、制备方法及其应用。本发明的副溶血性弧菌标准质粒样品采用副溶血性弧菌tlh、trh、toxR、gyrB、groEL基因以及自筛高特异靶基因VPA1585，使用重叠延伸PCR将特异性扩增片段串联并克隆至pUC19质粒形成；大肠杆菌O157：H7标准质粒样品采用大肠杆菌O157：H7 rfbE、fliC、stx1、stx2以及自筛高特异靶基因ECS2840，使用重叠延伸PCR将特异性扩增片段串联并克隆至pUC19质粒形成。本发明制备的标准质粒序列来源清晰、纯度高且应用能力良好，可应用于食源性致病菌核酸检测，为副溶血性弧菌、大肠杆菌O157：H7检测获得准确、可靠、具有可比性的检测结果提供保障。
一种溶血弧菌大肠杆菌 o157 h7 标准质粒构建方法及其应用

[发明专利]一种芽孢杆菌、微生物制剂及培养方法和应用-CN202211186310.8在审
发明人：赵海珍;王安;陆兆新;吕凤霞;别小妹;孟凡强 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-09-27 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种芽孢杆菌、微生物制剂及培养方法和应用，所述芽孢杆菌分类命名为LM1，保藏编号为CGMCC NO.24989，于2022年5月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明的芽孢杆菌，具有木质纤维素降解能力，具有很强的产纤维素酶和木质素酶的能力，能够通过发酵降解谷物膳食纤维中的木质纤维素，进而提高其中可溶性膳食纤维的含量。因此，本发明的具有降解木质纤维素能力的芽孢杆菌可用于制备纤维素酶或木质素酶，并可用于发酵谷物降解其中的木质纤维素，提高可溶性膳食纤维含量，进而提升谷物营养品质。
一种芽孢杆菌微生物制剂培养方法应用

[发明专利]一种基于饱和荧光染料的蜡样芽孢杆菌及其毒素的快速检测技术及试剂盒-CN202111057254.3在审
发明人： 别小妹;胡瑞瑞;陆兆新;胡安妥 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2021-09-09 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于饱和荧光染料的的蜡样芽孢杆菌及其毒素的快速检测技术及试剂盒。本方法针对蜡样芽孢杆菌的cer、bceT以及hblD基因，使用PMA和qPCR结合的方法，建立了检测蜡样芽孢杆菌活菌及其毒素的多重反应体系，并创新性地使用第三代饱和荧光染料SYTO 9Green替换了传统实时荧光PCR体系中的非饱和荧光染料SYBR Green I，以提高方法的灵敏度和熔解曲线分辨率，可实现闭管检测，减少样品污染；较之一般qPCR方法，可实现活菌检测，提高检测效率；较之TaqMan探针法，无需合成荧光基团修饰探针，较为经济实惠；实现了快速、准确地鉴定出蜡样芽孢杆菌活菌及其毒素的目的。
一种基于饱和荧光染料芽孢杆菌及其毒素快速检测技术试剂盒

[发明专利]一种检测副溶血性弧菌的特异性靶点、引物、检测方法及应用-CN202011282772.0有效
发明人： 别小妹;胡安妥;陆兆新;孔梁宇 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-11-17 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明提供一种检测副溶血性弧菌的特异性靶点、引物对、检测方法及应用。该方法本地数据库的初筛结果和在线比对的复筛结果发掘副溶血性弧菌中的可用于检测的特异性基因序列，利用发掘出的特异性靶基因结合传统靶基因构建双重实时荧光PCR方法，PCR引物对分别根据自筛靶基因VPA1585以及传统靶基因tlh设计而成，为保证检测方法的高特异性及灵敏度，采用双重实时荧光PCR方法，合理优化PCR反应体系，并创新创新性地使用第三代饱和荧光染料SYTO Green 9替换了传统实时荧光PCR体系中的非饱和荧光染料SYBR Green，可以快速、准确地鉴定出副溶血性弧菌。
一种检测溶血弧菌特异性引物方法应用

[发明专利]一种利用酿酒酵母生物降解棒曲霉素的方法-CN201910203377.X有效
发明人：陆兆新;吕凤霞;钟蕾;张充;别小妹;赵海珍 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2019-03-18 - 公布日： 2022-12-02 - 主分类号： A23L5/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用酿酒酵母生物降解棒曲霉素的方法，涉及生物技术领域。将酿酒酵母在培养基中培养至细胞浓度约为1.1~1.3×106CFU/mL，加入棒曲霉素后静置发酵，从而进行棒曲霉素的降解，96~120h后可以完全降解4.0~5.0mg/L棒曲霉素，在上述工艺条件下，棒曲霉素刺激酿酒酵母产生的可溶性胞内酶对该降解过程起决定作用。本发明使用酿酒酵母降解棒曲霉素，具有效率高、操作简单、安全环保等优点，对控制食品中棒曲霉素污染提供技术支撑。
一种利用酿酒酵母生物降解曲霉方法

[发明专利]一种提高Bacillomycin D发酵产量的方法-CN202210687664.4在审
发明人： 别小妹;张平;陆兆新;周立邦 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-06-17 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C07K7/56 文献下载
摘要：本发明提供了一种提高Bacillomycin D发酵产量的方法，以枯草芽孢杆菌fmbJ为出发菌株，通过添加生长因子VC，来提高Bacillomycin D产量。在本发明方法中，在发酵培养基中添加VC，可提高Bacillomycin D合成酶基因的相对表达量，促进氨基酸前体合成途径中关键酶基因转录，促进了degQ、comA、comP、comQ、sigM和spo0A等参与次级代谢产物合成的正调控信号因子的表达量上调，同时下调了一些负调控因子如rapC和abrB，使Bacillomycin D的产量提升至对照组的1.44倍；同时本发明方法成本低、操作简单方便，可以有效降低脂肽的生产成本、提高生产效率，有望用于大规模生产应用。
一种提高 bacillomycin 发酵产量方法

[发明专利]一种通过脂肪酸代谢调控提高抗菌脂肽bacillomycin D产量的方法-CN202210686685.4在审
发明人： 别小妹;马文杰;陆兆新;周立邦 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2022-06-17 - 公布日： 2022-08-05 - 主分类号： C12P21/04 文献下载
摘要：本发明属于微生物学发酵领域，具体涉及一种利用脂肪酸代谢调控提高抗菌脂肽bacillomycin D产量的方法：以一株能够合成bacillomycin D的芽孢杆菌为出发菌株，在发酵起始时分别添加0.25~5 mmol/L的丙酸钠、丙酸、丁酸等3种脂肪酸或脂肪酸盐，增加培养基中的游离脂肪酸，进而调控脂肪酸代谢途径，增加活性bacillomycin D发酵产量。本发明在基础培养基中添加丙酸钠、丙酸以及丁酸，均可使bacillomycin D产量显著提高，分别可达到对照组的1.44倍、1.4倍和1.1倍；丙酸钠的添加促进bacillomycin D合成基因的表达，从基因水平上佐证了其对bacillomycin D合成的促进作用。同时，丙酸钠可以引发部分信号因子表达上调，这些上调均可促进bacillomycin D的合成。此外，丙酸钠还可促进部分脂肪酸代谢相关酶的表达上调，进而促进脂肪酸的代谢。
一种通过脂肪酸代谢调控提高抗菌 bacillomycin 产量方法

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