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[发明专利]人胚皮层神经干细胞的分离培养方法-CN201110447873.3无效
发明人：陆华 -专利权人：陆华
申请日： 2011-12-27 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明提出一种人胚皮层神经干细胞的分离培养方法，其包括以下步骤：原代细胞的分离和培养；传代培养及单细胞克隆、传代；克隆诱导分化；以及间接免疫荧光检测。本发明采用无血清培养和单细胞克隆技术从从胚龄12周的新鲜人胚皮层中成功建立一株人胚神经干细胞，该细胞具有连续克隆能力，可传达培养，表达神经巢蛋白抗原。分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。
皮层神经干细胞分离培养方法

[发明专利]适应鸡新城疫病毒增殖的BHK细胞系的建立方法及其应用-CN201310120764.X无效
发明人：李明义;陈欢;刘阳;冯晶晶;单学强;张伦;郭春丽;李佳琪 -专利权人：山东信得科技股份有限公司
申请日： 2013-04-02 - 公布日： 2013-10-02 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种适应鸡新城疫病毒增殖的BHK细胞系的建立方法以及在鸡新城疫病毒的增殖中的应用。本发明通过改进新城疫病毒培养方式、优化培养参数、筛选传代细胞，建立传代细胞疫苗生产工艺，生产工艺流程将大大简化，生产过程更加可控。
适应新城疫病增殖 bhk 细胞系建立方法及其应用

[发明专利]一种制备猪伪狂犬病病毒疫苗的方法及疫苗制品-CN201410763259.1在审
发明人：田克恭;孙进忠;王进产;张许科 -专利权人：普莱柯生物工程股份有限公司
申请日： 2014-12-12 - 公布日： 2016-07-06 - 主分类号： A61K39/245 文献下载
摘要：本发明涉及一种制备猪伪狂犬病病毒疫苗的方法，该方法包括以下步骤：(1)制备悬浮传代细胞；(2)扩增培养该步骤(1)制备的悬浮传代细胞；以及(3)在该步骤(2)扩增培养后的悬浮传代细胞接种伪狂犬病病毒，扩增培养伪狂犬病病毒
一种制备狂犬病病毒疫苗方法制品

[发明专利]利用NK/T淋巴瘤细胞株所构建的免疫缺陷小鼠模型-CN201810555283.4在审
发明人：张明智;薛伟丽;王新华 -专利权人：郑州大学第一附属医院
申请日： 2018-06-01 - 公布日： 2018-11-06 - 主分类号： C12N15/89 文献下载
摘要：本申请属于动物肿瘤模型构建技术领域，具体涉及一种利用NK/T淋巴瘤细胞株所构建的、可稳定传代的免疫缺陷小鼠模型及其构建方法的专利申请事宜。该方法包括：分别对接种对象及淋巴瘤细胞株进行预处理，制备肿瘤混悬液并注射小鼠，肿瘤细胞传代等步骤。所述免疫缺陷小鼠模型在医学中可用于药物筛选或疗效评估。本申请所提供的利用NK/T淋巴瘤细胞株构建淋巴瘤动物模型的构建方法，其利用基质胶的固定作用，可将淋巴瘤细胞固定在皮下，从而保证小鼠的成瘤率，表现出成瘤快、成瘤率高的技术优势；另一方面，传代过程中，配合相关肿瘤组织培养液的冻存操作，可随时复苏和直接构建传代用淋巴瘤动物模型。
构建淋巴瘤细胞株传代免疫缺陷小鼠动物模型成瘤率淋巴瘤培养液申请动物肿瘤模型预处理淋巴瘤细胞固定作用技术优势接种对象疗效评估药物筛选肿瘤细胞肿瘤组织注射小鼠混悬液基质胶成瘤冻存可用皮下小鼠制备肿瘤复苏医学配合表现保证

[发明专利]一种用传代细胞源生产猪伪狂犬病活疫苗的方法及其制品-CN201310355677.2有效
发明人：张许科;孙进忠;田克恭 -专利权人：普莱柯生物工程股份有限公司
申请日： 2013-08-15 - 公布日： 2017-09-05 - 主分类号： A61K39/245 文献下载
摘要：本发明提供了一种用传代细胞源生产猪伪狂犬病活疫苗的方法及其猪伪狂犬病活疫苗产品。该方法包括如下步骤用传代细胞培养猪伪狂犬病病毒弱毒株；收获得到细胞培养毒液；再加入稳定剂，经冷冻真空干燥得到传代细胞源猪伪狂犬病活疫苗。使用时，还可以使用本发明制备的疫苗稀释液。本发明用传代细胞源生产猪伪狂犬病活疫苗的方法具有生产工艺简单且稳定、易操作、病毒含量高、批间差异小、质量可控、可显著提高疫苗产量和质量等优点。
一种传代细胞生产狂犬病疫苗方法及其制品

[发明专利]来源于嗅粘膜神经元细胞分离制备技术-CN201510935540.3有效
发明人：黄红云;高文勇;姜晓荣 -专利权人：北京市虹天济神经科学研究院
申请日： 2015-12-15 - 公布日： 2019-09-24 - 主分类号： C12N5/0793 文献下载
摘要：来源于嗅粘膜神经元细胞分离制备技术本发明提供了一种嗅粘膜神经元的分离培养、传代、冻存、分化技术。特色步骤包括：1、嗅粘膜神经元基础培养基的配置；2、原代培养技术；3、专用传代培养基的配置：收集处理培养基上清液，用于配置嗅粘膜神经元传代培养基；4、重复传代培养技术；5、冻存保护液的配置；收集处理培养基上清液，用于配置嗅粘膜神经元细胞冻存液；6、超低温冷冻保存；7、细胞复苏分化技术。本专利选取上鼻甲三分之一嗅区粘膜进行分离培养增殖、冻存、分化，并获得大量高纯度的嗅粘膜神经元细胞，目前大量基础和临床实验结果证明，该细胞具有综合神经修复作用，能有效改善神经系统疾病和损害患者的神经损伤功能和生存质量
来源于粘膜神经元细胞分离制备技术

[发明专利]一种山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法-CN202210275477.5在审
发明人：贺志雄;张天西;程艳;杨超;谭支良 -专利权人：中国科学院亚热带农业生态研究所
申请日： 2022-03-21 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种山羊胰腺腺泡细胞的分离培养及鉴定方法，所述方法包括如下步骤：（1）将1‑3mm3山羊胰腺组织清洗后离心，弃上清，然后向离心后的沉淀中添加消化液进行山羊胰腺组织消化处理；（2）终止消化后，离心并弃上清，用原代培养基混匀离心后的沉淀，得山羊胰腺腺泡悬液；（3）依次采用差时消化、差时贴壁及细胞刮取的方式对山羊胰腺腺泡细胞悬液中的山羊胰腺腺泡细胞进行纯化处理；（4）将纯化处理后所得的山羊胰腺腺泡细胞接种至传代培养基中进行传代培养；（5）对传代培养后的山羊胰腺腺泡细胞进行鉴定。
一种山羊胰腺细胞分离培养鉴定方法

[发明专利]一种鳜鱼脊髓组织细胞系-37及其构建方法与应用-CN202310578264.4在审
发明人：姚嘉赟;巩金鹏;潘晓艺;赵颖;蔺凌云;刘忆瀚;沈锦玉 -专利权人：浙江省淡水水产研究所
申请日： 2023-05-22 - 公布日： 2023-09-12 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明提供一种鳜鱼脊髓组织细胞系‑37及其构建方法与应用。该鳜鱼脊髓组织细胞系‑37于2022年12月16日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2022352，命名为：鳜（Siniperca chuatsi细胞的传代以及三次驯化培养。该细胞系‑37可以稳定培养，连续传代，可以大规模生产鳜鱼脊髓组织细胞，且所用血清价廉，传代后有较好的生长状态，可进行冻存与复苏。并且该细胞系对蛙虹彩病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、弹状病毒均敏感，且病变时间加快。可很好地进行鳜鱼病毒分离、培养、检测及疫苗研究。
一种鳜鱼脊髓组织细胞系 37 及其构建方法应用

[发明专利]一种人羊膜间充质干细胞的分离培养方法-CN201710046110.5在审
发明人：刘英;谷涌泉 -专利权人：北京天晟宇生物科技有限公司
申请日： 2017-01-20 - 公布日： 2017-05-17 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种羊膜间充质干细胞的分离培养方法，属于生物技术领域。一种羊膜间充质干细胞的分离培养方法，包括：(一)细胞分离；(二)细胞培养：将分离的人羊膜单个核细胞接种于塑料培养瓶，培养于37℃，培养箱，培养液为人羊膜间充质干细胞专用培养基；24小时后换液，弃非贴壁细胞，以后每2～3天换液；待人羊膜间充质干细胞生长到70～80％融合，用胰酶消化，传代；每2～3天用人羊膜间充质干细胞专用培养基中传代一次，每次传代培养的条件均为37℃，本发明得到的人羊膜间充质干细胞是表达如下三种细胞膜分子：人白细胞分化抗原CD73、人白细胞分化抗原CD90和人白细胞分化抗原不表达人白细胞分化抗原和人白细胞抗原HLA‑DR。
一种羊膜间充质干细胞分离培养方法

[发明专利]一种子宫内膜干细胞的分离培养方法-CN201911295703.0在审
发明人：王健;侯雷;何灿洋;何灿平;竺亚斌 -专利权人：杭州恩格生物医疗科技有限公司
申请日： 2019-12-16 - 公布日： 2020-04-21 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了干细胞培养相关技术领域的一种子宫内膜干细胞的分离培养方法，包括干细胞原料获取、原代培养、P1代细胞培养、Pn代细胞培养等步骤，还可以包括冷冻保藏步骤；通过本发明的技术方案分离培养的子宫内膜干细胞迁移能力强；具有多向分化潜能；在体外能够快速扩增；能够从P1持续培养，尽量延长干细胞传代代数，克服传代代数少，需要从子宫内膜取材的限制。
一种子宫内膜干细胞分离培养方法

[发明专利]一种高效低毒的质粒DNA转染方法-CN201810055524.9有效
发明人：郭继华;贾荣;贾俊;郭辰 -专利权人：武汉大学
申请日： 2018-01-19 - 公布日： 2020-10-13 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本发明方法包括如下步骤：(1)以20％‑30％的细胞密度接种细胞，进行培养；(2)当细胞密度生长至40％‑60％时，进行传代培养；(3)待传代培养的细胞处于刚贴壁未伸展状态时，用质粒‑转染剂混合物转染细胞本发明提高了细胞转染效率，同时对细胞毒性较小，不需要额外的设备或者试剂，方便操作和掌握，易于推广。
一种高效低毒质粒 dna 转染方法

[发明专利]藏羚羊皮肤成纤维细胞系的构建方法-CN201010201826.6无效
发明人：赵新全;于鸿浩;郭志林;郭松长;曹俊虎;徐世晓 -专利权人：中国科学院西北高原生物研究所
申请日： 2010-06-12 - 公布日： 2010-10-27 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种藏羚羊皮肤成纤维细胞系的构建方法，该方法包括以下步骤：(1)采样；(2)藏羚羊耳部皮肤组织原代培养；(3)传代与纯化；(4)细胞冻存；(5)细胞复苏。本发明通过建立原代培养、细胞传代、细胞冻存与复苏的方法，获得了高活力藏羚羊成纤维细胞系，为深入开展藏羚羊分子生物学及细胞生物学的相关研究提供了研究材料与技术支持。
羚羊皮肤纤维细胞系构建方法

[发明专利]用于早产儿脑出血后遗症的自体生发基质干细胞培养方法-CN202210484414.0在审
发明人：陈金虎 -专利权人：浙江以和细胞生物科技有限公司
申请日： 2022-05-06 - 公布日： 2022-06-21 - 主分类号： C12N5/0797 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于早产儿脑出血后遗症的自体生发基质干细胞培养方法，该方法包括步骤：1)从脑出血早产儿的侧脑室收集血性脑脊液；2)离心收集细胞；3)用神经干细胞培养基重悬细胞并维持培养；4)3‑5天半量换液，6‑8天后消化细胞并进行传代培养；5)传代至3‑5代后，收集所述生发基质干细胞。本发明通过原代和传代培养，使患儿自体神经干细胞获得大量的扩增，之后进行冻存，在合适的时候复苏并回植入患儿脑内，可大大提高早产儿脑出血后遗症的治疗效果。用本发明的培养方法培养的生发基质干细胞扩增数量多且具有稳定的性质，可满足治患儿自体疗的需求。
用于早产儿脑出血后遗症生发基质干细胞培养方法

[发明专利]牛肌卫星细胞的体外分离培养及诱导分化的方法-CN201010231364.2无效
发明人：严云勤;佟慧丽;李树峰;兴孝友;高学军;陆黎敏;李光鹏;金慧然 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2010-07-20 - 公布日： 2010-11-17 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：牛肌卫星细胞的体外分离培养及诱导分化的方法，它涉及细胞的体外分离培养及诱导分化的方法。它解决了现有牛肌卫星细胞的分离培养存在成本高，传代稳定性不好，且诱导分化存在所获肌管数量少及不具有收缩功能的问题。方法：清洗组织，用胰蛋白酶和胶原酶液消化；过滤后离心，重悬细胞，接种后用差速贴壁法培养细胞；培养至汇合率为95%，用胰酶进行传代即完成。方法：获得PEI-质粒复合物；牛肌卫星细胞培养至汇合率为75%，清洗后加DMEM高糖培养液，将PEI-质粒复合物加到细胞表面，更换培养液A培养，再更换培养B诱导分化即完成。本发明牛肌卫星细胞的分离培养成本低，传代稳定性好，诱导分化所获肌管数量大且具有收缩功能。
卫星细胞体外分离培养诱导分化方法

[发明专利]一种脂肪干细胞的分离及传代培养的方法-CN201811560112.7在审
发明人：朱学义;张雪梅;闫爽;王彦;李雯雯;魏天迪 -专利权人：河南省银丰生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2018-12-20 - 公布日： 2019-03-22 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种脂肪干细胞的分离及传代培养的方法，包括脂肪采集、获取并制备小块脂肪组织、制备脂肪单细胞悬液、免疫磁珠分选、流式细胞分选、脂肪干细胞培养和脂肪干细胞传代培养。制备小块脂肪组织为1‑2m³左右的脂肪小块，并采用胰蛋白酶联合I型‑II型混合胶原酶时间梯度消化法对脂肪小块进行消化，使得组织消化更彻底，脂肪干细胞培养时所使用的培养箱温度设有37℃，且内部充有含量为5%的CO₂气体，满足造血干细胞生长繁殖所需环境及温度，能够提高脂肪干细胞的培养速度，原代培养细胞达到85%融合时,以25%胰蛋白酶将贴壁细胞消化分离3~5分钟,并按照1：3的比例进行接种，保证传代接种后的细胞密度。
脂肪干细胞小块传代培养胰蛋白酶消化制备脂肪脂肪组织接种传代流式细胞分选免疫磁珠分选原代培养细胞单细胞悬液造血干细胞时间梯度贴壁细胞脂肪采集混合胶培养箱原酶繁殖细胞融合生长保证联合