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[发明专利]一种草金鱼腹鳍细胞系的构建方法-CN201510206830.4有效
发明人：王浩;吕利群;许丹;喻文娟;喻飞;孔善云;黄美秀 -专利权人：上海海洋大学
申请日： 2015-04-27 - 公布日： 2017-06-16 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明涉及一种草金鱼腹鳍细胞系及其构建方法，针对草金鱼腹鳍组织细胞的特征，采用胰蛋白酶、EDTA、透明质酸酶对组织块进行消化，将消化后的组织块移植到培养瓶中，加入专用增殖培养液进行原代培养，继而构成功构建草金鱼腹鳍细胞系通过本发明的方法原代培养3天后均能分离大量细胞，均具有连续传代的能力；稳定传代后，细胞呈典型的成纤维形态，证明该细胞系是一种特性稳定、成分均一的中国草金鱼腹鳍细胞系，是作为研究水产动物病毒学和免疫学的良好材料目前，该草金鱼腹鳍细胞系已传代60代，细胞能稳定增殖，具有连续传代的能力。
种草金鱼腹鳍细胞系构建方法

[发明专利]用传代细胞系制备羊口疮病毒的方法-CN201610234746.8有效
发明人：张燕红;刘国英;范秀丽;苍枫;路荣;李雪峰 -专利权人：金宇保灵生物药品有限公司
申请日： 2016-04-15 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种用传代细胞系制备羊口疮病毒的方法及其应用。使用传代细胞系接种羊口疮病毒，接种24h后细胞形态发生变化，48h后细胞开始肿胀、膨大，72‑96h细胞出现羊口疮典型病变，细胞病变(CPE)可达85％以上。本发明用传代细胞系制备羊口疮病毒的方法可以保证病毒的均一、稳定，同时可以防止因多次利用原代细胞而使所分离的病毒带有其它病原的风险；此外，利用传代细胞系制备羊口疮疫苗简化了疫苗的生产工艺、缩短了生产周期，
传代细胞系制备口疮病毒方法

[实用新型]用于疫苗生产的自动化传代操作系统-CN202120062886.8有效
发明人：朱绍荣;蔡明勇 -专利权人：上海荣盛生物药业有限公司
申请日： 2021-01-11 - 公布日： 2021-10-15 - 主分类号： C12M3/00 文献下载
摘要：一种用于疫苗生产的自动化传代操作系统，包括用于培养细胞的第一细胞工厂，用于接收传代细胞的第二细胞工厂，放置培养液的第一储罐，放置消化液的第二储罐，放置培养废液的第三储罐、第一阀体、第二阀体、第三阀体和负压发生装置阀体分别与第一储罐、第二储罐、第三储罐和细胞工厂连通，负压发生装置分别与第一储罐和第三储罐连接。本实用新型的操作系统，在控制系统和机械装置(如：机械臂)的参与下，各个细胞工厂即能获取传代细胞，也能在接收传代细胞后，在位培养，或者更换管路上的细胞工厂用于后续的生物制品制造环节，比如：收集、分离和纯化等
用于疫苗生产自动化传代操作系统

[发明专利]一种牙鲆肠道上皮细胞系及其构建方法和应用-CN202310031053.9在审
发明人：修云吉;郭宝山;苏琳;逄云飞;周顺 -专利权人：青岛农业大学
申请日： 2023-01-10 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种牙鲆肠道上皮细胞系及其构建方法和应用，涉及海洋生物细胞培养领域。该构建方法包括以下步骤：(1)取牙鲆的肠道，去除所述肠道上的脂肪和腹膜后，得到肠壁组织，之后置于装有完全培养液的培养容器中进行贴壁培养；(2)步骤(1)贴壁培养获得的细胞，消化后进行传代培养，传代培养50代，得到所述牙鲆肠道上皮细胞系。利用本发明的构建方法可以成功构建得到牙鲆肠道上皮细胞系，该细胞系的主要特点是：细胞系可以连续传代50代或以上，生长速度快，传代频率高，能提供大量的牙鲆肠道上皮细胞；细胞的生长状态良好，能稳定增殖，细胞系的主要细胞类型为铺路石样细胞
一种肠道上皮细胞系及其构建方法应用

[发明专利]一种小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法-CN201911099193.X在审
发明人：冷毅斌;吴亭;尚振波 -专利权人：武汉普诺赛生命科技有限公司
申请日： 2019-11-12 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提出了一种小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法，本发明切取小鼠或大鼠的完整肾脏，用胰蛋白酶和IV型胶原酶联合消化，在完全培养基中培养5‑7d后经免疫荧光鉴定纯度可达95％以上，将分离的成纤维细胞用成纤维专用培养基传代培养，细胞增殖快、纯度高。本发明提出的一种小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法，取材方便，操作简单，细胞增殖快、得率高、纯度高，是一种理想的小鼠或大鼠肾成纤维细胞分离及传代培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。
传代培养大鼠小鼠肾成纤维细胞细胞增殖胰蛋白酶成纤维细胞完全培养基专用培养基免疫荧光得率切取肾脏取材纤维细胞消化联合

[发明专利]适应人乙肝病毒自然感染复制并可传代培养的杂交细胞系-CN200710112948.6无效
发明人：马立宪;王刚;邵丽华;江渊;王爱华 -专利权人：山东大学齐鲁医院
申请日： 2007-09-19 - 公布日： 2008-04-09 - 主分类号： C12N5/22 文献下载
摘要：本发明涉及一种适应人乙肝病毒自然感染复制并可传代培养的杂交细胞系及其制备方法，杂交细胞系HepCHLine是由人原代肝细胞和筛选HGPRT阴性的HepG2作为亲本细胞，经融合杂交而得，是一种全新的物质。HepCHLine继承了亲代人肝细胞对HBV感染的敏感性和HepG2能接种动物或传代培养的特性，既能适应HBV的自然感染又能长期传代培养。本发明首次制备出适应人乙肝病毒自然感染复制并可传代培养的杂交细胞系HepCHLine，很好地满足了对人HBV及其自然状态下感染宿主细胞研究的需要。
适应乙肝病毒自然感染复制传代培养杂交细胞系

[发明专利]一种采用两次细胞培养工艺提高病毒液病毒含量的方法-CN201611153492.3有效
发明人：吴越;万成燕;冯锡良;周俊花;曾衍华;陈树林;黄梅 -专利权人：四川省华派生物制药有限公司
申请日： 2016-12-14 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种采用两次细胞培养工艺提高病毒液病毒含量的方法，包括细胞培养：取生长良好的传代细胞；传代时细胞的接种密度为20万~40万个/ml，获得接种细胞；制备种毒：取生长良好的传代细胞加入生长液使传代细胞长成单层后弃掉生长液接种基础种毒，冻融后收获得到生产用种毒；制备细胞悬液以及制备病毒液。本发明在现有常规的生产工艺上进行了优化，在单层细胞接种后再加入细胞悬液进行两次细胞培养工艺，能够打破现有生产工艺的瓶颈，有效提高病毒液中病毒的含量和滴度，有效缩短生产周期，提高产品质量，降低生产成本；同时本发明的方法还具有操作简单和重复性好的特点
传代细胞病毒液种毒接种细胞培养工艺生长液制备生产工艺细胞培养传代缩短生产周期制备细胞悬液病毒单层细胞接种细胞细胞悬液常规的生长单层滴度冻融瓶颈细胞收获优化生产

[发明专利]一种大规模制备传代鸡胚细胞生产病毒的方法-CN202110126787.6有效
发明人：朱为;张林亚;周旭 -专利权人：上海生物制品研究所有限责任公司
申请日： 2021-01-29 - 公布日： 2022-12-30 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明提供了一种大规模制备传代鸡胚细胞生产病毒的方法。具体地，本发明提供了一种在无二氧化碳或低二氧化碳条件下，连续传代培养鸡胚细胞生产病毒类产品的方法。本发明的方法简单高效，可以在无二氧化碳或低二氧化碳下实现原代鸡胚细胞的连续传代，尤其适用于在多层细胞工厂中大规模制备传代鸡胚细胞，进而实现病毒类产品的规模化生产。
一种大规模制备传代细胞生产病毒方法

[发明专利]一种用传代细胞系生产猪伪狂犬活疫苗的方法-CN201710437501.X有效
发明人：张毓金;严悌昆;黄淑芬 -专利权人：广州渔跃生物技术有限公司
申请日： 2017-06-09 - 公布日： 2019-09-06 - 主分类号： A61K39/245 文献下载
摘要：本发明属于兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种用传代细胞系生产猪伪狂犬病活疫苗的方法。本发明所用传代细胞系为Vero细胞，通过制苗用细胞的传代与培养、细胞毒种的繁殖、制苗毒液的繁殖及配苗、分装及冻干操作步骤制得。
一种传代细胞系生产狂犬疫苗方法

[发明专利]一种羔羊睾丸支持细胞自然传代细胞系及其在羊痘病毒分离培养和增殖中的用途-CN201610674898.X有效
发明人：王光祥;张志东;尚佑军;刘湘涛;王艳华;吴锦艳;陈妍;张克山;田宏;尹双辉 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2016-08-16 - 公布日： 2019-07-26 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种羔羊睾丸支持细胞自然传代细胞系及其在羊痘病毒分离培养和增殖中的用途。本发明的细胞系是通过对羔羊睾丸原代细胞进行分离和纯化得到羔羊睾丸支持细胞后，经过自然传代得到的一种羔羊睾丸支持自然传代细胞系。研究发现，该细胞系对于接种羊痘病毒较为敏感，用该细胞系所增殖的病毒滴度较新生羊睾丸原代细胞、Vero细胞以及BHK₂₁细胞分别高约1.5、2.5以及2.3个病毒滴度。利用该细胞系分离羊痘病毒可保证病毒的均一、稳定，同时可防止因多次利用原代细胞而使所分离的病毒带有其他病原的风险。此外，利用该传代细胞系制备疫苗简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，并且保证了疫苗质量稳定，对疫苗规模化生产具有一定的现实意义。
一种羔羊睾丸支持细胞自然传代细胞系及其痘病毒分离培养增殖中的用途

[发明专利]非基质胶依赖性的间充质干细胞的制备和扩增方法-CN202310370285.7在审
发明人：赵建芝;张奇辉;陈肇龙 -专利权人：杭州瑞普晨创科技有限公司
申请日： 2023-04-07 - 公布日： 2023-07-11 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种非基质胶依赖性的间充质干细胞的制备和扩增方法，包括以下步骤：(1)培养增殖诱导多能干细胞，得到培养后的诱导多能干细胞；(2)将培养后的诱导多能干细胞更换成MSC诱导培养基，进行诱导培养，诱导培养14天后，转移至无基质胶的培养板上，进行传代培养，传代培养所用的培养基和MSC诱导培养基相同，传至第三代开始出现间充质干细胞，多次传代扩增，检测合格，即获得间充质干细胞。本发明采用了新的诱导培养基和传代培养基，iPSC诱导的MSC在传代培养时无需基质胶，细胞增殖能力快，活力高，贴壁情况良好，不依赖于基质胶的存在，而且没有外来动物源成分，有利于产品的商业化以及大批量生产应用
基质依赖性间充质干细胞制备扩增方法

[发明专利]一种利用生物反应器生产猪传染性胃肠炎病毒的方法-CN201210141452.2有效
发明人：于萍萍;王贵华;侯艳红 -专利权人：北京大北农科技集团股份有限公司;福州大北农生物技术有限公司
申请日： 2012-05-08 - 公布日： 2012-09-12 - 主分类号： C12N7/00 文献下载
摘要：本发明提供一种利用生物反应器生产猪传染性胃肠炎病毒的方法，包括如下步骤：1)制备单层传代细胞；2)制备猪传染性胃肠炎病毒生产用种毒；3)将步骤1)制备的单层传代细胞制备成细胞悬液，接种到生物反应器内，使传代细胞在生物反应器中的微载体上吸附培养；4)当传代细胞长至微载体的80％-90％，空球率低于5％，满球率大于80％，细胞计数达到3-5×106个/mL以上时，以2-5％的接种量接种步骤2)制备的种毒，进行病毒的吸附培养；4)当微载体上的传代细胞
一种利用生物反应器生产传染性胃肠炎病毒方法

[发明专利]一种人脐带间充质干细胞的分离及血清梯度切换培养方法-CN201110444748.7无效
发明人：李力;肖扬 -专利权人：肖扬
申请日： 2011-12-26 - 公布日： 2012-07-04 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种人脐带间充质干细胞的分离及血清梯度切换培养方法。它是取人脐带用胶原酶II消化，直至Wharton胶全部消化，然后收集消化下来的单细胞，将单细胞接入α-MEM培养基中悬浮培养，直至细胞达到80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化；将胰蛋白酶消化的细胞悬液传代接种于α-MEM培养基中悬浮培养，直至细胞达到80％～90％融合时，用胰蛋白酶消化，再传代接种于α-MEM培养基中悬浮培养，如此重复进行传代培养，本步骤中的传代培养的α-MEM培养基中的胎牛血清的浓度是随传代次数的增加而递减直至无胎牛血清该方法的取材-人脐带来源广泛、制备人脐带间充质干细胞快速、安全，不受伦理限制，后续培养不依赖胎牛血清的特征使得培养成本和临床使用风险大幅降低，具有很好的应用前景。
一种脐带间充质干细胞分离血清梯度切换培养方法

[发明专利]一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法-CN201510065430.6有效
发明人：张守全;白银山;冯美莹;卫恒习;李莉 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2015-02-06 - 公布日： 2017-12-29 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种长白仔猪睾丸支持细胞永生系的建立方法，包括步骤取长白仔猪睾丸组织，获取高比例的长白仔猪睾丸支持细胞以后，完全培养基培养1～2h后更换新鲜培养液，继续培养，最后传代至细胞形态均一的F3代的睾丸成纤维细胞；利用携带Large T和Egfp基因的慢病毒液侵染成纤维细胞，获得特征的并且表达Egfp和支持细胞标记的细胞株；使用优化的培养液培养传代超过50代以后，获得长白仔猪睾丸支持细胞永生系。本发明的长白仔猪睾丸支持细胞永生系体外传代次数已超过90代，对比市场上已建立猪睾丸传代ST细胞，本发明永生化的长白仔猪支持细胞系维持了原代的支持细胞生物学特征，更适合支持细胞的生物学性质研究，可以应用于疫苗开发和药物筛选等方面研究
一种仔猪睾丸支持细胞永生建立方法

[发明专利]小鼠胚胎肝基质细胞KM3作为人胚胎干细胞饲养层细胞的用途-CN201310718153.5无效
发明人：胡嘉波;张微;麻全慧;胡三强;徐虹 -专利权人：江苏大学
申请日： 2013-12-24 - 公布日： 2014-04-09 - 主分类号： C12N5/0735 文献下载
摘要：本发明涉及小鼠胚胎肝基质细胞KM3作为人胚胎干细胞饲养层细胞的用途。具体是KM3细胞经过10μg/ml的丝裂霉素C处理2h后，在液氮中冻存60d，复苏后细胞可作为人胚胎干细胞传代培养的饲养层细胞，支持人胚胎干细胞稳定传代。
小鼠胚胎基质细胞 km3 为人干细胞饲养用途