[发明专利]一种TRV载体介导病毒诱导梅花花芽基因沉默的方法在审
| 申请号： | 202310973152.9 | 申请日： | 2023-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN116904499A | 公开（公告）日： | 2023-10-20 |
| 发明（设计）人： | 张曼;张启翔;程文辉;程堂仁;王佳 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学 |
| 主分类号： | C12N15/83 | 分类号： | C12N15/83;C12N15/29;A01H5/02;A01H6/74 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 高辉 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： |
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种TRV载体介导病毒诱导基因沉默的方法，采用含有特定目标基因片段的TRV2载体与TRV1载体分别转化到农杆菌感受态中，并将含有这两种载体的单克隆菌体混合，利用侵染液重悬得到混合侵染液，在抽真空状态下侵染梅花花芽，实现对梅花花芽目标基因的沉默。本发明深入探究了提高目标基因沉默效率的关键因素，筛选出了侵染梅花花芽时TRV1和TRV2最佳的混合比例、含有菌体的侵染液的OD |
||
| 搜索关键词： | 一种 trv 载体 病毒 诱导 梅花 花芽 基因 沉默 方法 | ||
【主权项】：
暂无信息
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于北京林业大学，未经北京林业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/202310973152.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- TaMYB1基因用于提高植株对Cd耐受的应用-202310482821.2
- 张怡;李成伟;李俐俐;胡春红;上官欣欣;罗奇;王丹峰;徐克东;李晓丽;雷杰 - 周口师范学院
- 2023-05-03 - 2023-10-27 - C12N15/83
- 本申请涉及农业生物技术领域，具体涉及TaMYB1基因用于提高植株对Cd耐受的应用。本申请以酵母和小麦为研究材料，通过在酵母培养基中加入不同浓度的Cd离子筛选Cd胁迫小麦根系酵母双杂交文库，获得小麦Cd胁迫应答相关基因TaMYB1，利用病毒诱导的基因沉默技术对相关基因进行功能验证和表型分析，并对TaMYB1进行生物信息学分析，为TaMYB1响应Cd胁迫的功能研究和低积累Cd小麦新品种的培育奠定基础。
- 一种TRV载体介导病毒诱导梅花花芽基因沉默的方法-202310973152.9
- 张曼;张启翔;程文辉;程堂仁;王佳 - 北京林业大学
- 2023-08-04 - 2023-10-20 - C12N15/83
- 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种TRV载体介导病毒诱导基因沉默的方法，采用含有特定目标基因片段的TRV2载体与TRV1载体分别转化到农杆菌感受态中，并将含有这两种载体的单克隆菌体混合，利用侵染液重悬得到混合侵染液，在抽真空状态下侵染梅花花芽，实现对梅花花芽目标基因的沉默。本发明深入探究了提高目标基因沉默效率的关键因素，筛选出了侵染梅花花芽时TRV1和TRV2最佳的混合比例、含有菌体的侵染液的OD
- 一种防治烟草普通花叶病毒的疫苗及其制备方法-202211358915.0
- 杨铁钊;周方;周健飞;何冰;武兆云;徐世晓;孙聚涛;李俊营;郭玉鸽 - 河南农业大学
- 2022-11-01 - 2023-09-29 - C12N15/83
- 本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一种防治烟草普通花叶病毒（TMV）的疫苗，包括pTRV1和至少一种重组表达载体pTRV2‑G‑目标基因，所述目标基因为TMV‑30、TMV‑126、TMV‑183或TMV‑CP，序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。在烟草上使用时，先在所述疫苗中加入缓冲液对其进行活化，混合均匀；在室温下遮光存放，将所得混合液兑水，然后将其均匀地喷洒到剪叶的烟苗上，喷洒量为叶面有肉眼可见的水珠即可。本发明菌液能够有效沉默外源侵入的烟草普通花叶病毒基因表达，基因沉默效率最高达43.9%，有效的抑制了烟草普通花叶病毒在植株体内的传播，发病时间推迟。
- 一种防治黄瓜花叶病毒的疫苗及其制备方法-202211358914.6
- 杨铁钊;周方;周健飞;何冰;武兆云;徐世晓;孙聚涛;李俊营;郭玉鸽 - 河南农业大学
- 2022-11-01 - 2023-09-29 - C12N15/83
- 本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一种防治黄瓜花叶病毒（CMV）的疫苗，包括pTRV1和四种重组表达载体pTRV2‑目标基因，所述目标基因分别为CMV‑1a、CMV‑2a、CMV‑MP和CMV‑CP，序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。在烟草上使用时，先在所述疫苗中加入缓冲液对其进行活化，混合均匀；在室温下遮光存放，将所得混合液兑水，然后将其均匀地喷洒到剪叶的烟苗上，喷洒量为叶面有肉眼可见的水珠即可。本发明能够有效沉默外源侵入的黄瓜花叶病毒基因的表达，基因沉默效率最高达60.4%，有效的抑制了黄瓜花叶病毒在植株体内的传播，发病时间推迟。
- 野生稻类幽影病毒B侵染性克隆载体及其构建方法-202310786639.6
- 韩艳红;朱丽娟;赵珊珊;白雅妮;王驰;吴婷 - 福建农林大学;三明学院
- 2023-06-30 - 2023-09-22 - C12N15/83
- 本发明公开了一种野生稻类幽影病毒B（wild rice umbra‑like virus B，WrULVB）侵染性克隆载体及其构建方法，以野生稻病叶为材料获得WrULVB基因组全序列的基础上，通过多片段同源重组的方式将其克隆到含花椰菜花叶病毒双35S启动子的pCassRZ双元载体而获得。本发明首次获得能通过农杆菌介导的对本生烟有系统侵染能力的病毒载体pCassRZ‑WrULVB，为通过反向遗传学研究该病毒侵染、复制、运动、传播及致病机制等奠定基础，使将其改造成载体工具成为可能。
- 一种PpyBZR2基因在促进梨休眠芽萌发中的应用-202311004396.2
- 滕元文;王旭旭;白松龄;魏佳;王端倪 - 浙江大学海南研究院
- 2023-08-10 - 2023-09-12 - C12N15/83
- 发明公开了一种PpyBZR2基因在促进梨休眠芽萌发中的应用，本发明通过兼并性引物将其克隆，利用病毒介导的转基因技术，将基因的超量表达载体转入梨芽中，发现过量表达（Overexpression,OE）
- 油菜花叶病毒侵染性克隆表达载体及其构建方法-202111640399.6
- 孙现超;韦学锋;王晶;刘昌云;刘维娜;田绍锐 - 西南大学
- 2021-12-29 - 2023-08-29 - C12N15/83
- 本发明属于植物基因工程技术领域，尤其涉及油菜花叶病毒侵染性克隆表达载体及其构建方法。本发明侵染性克隆表达载体pCaYo是由油菜花叶病毒全长序列置于双35S启动子下游制备得到；所述油菜花叶病毒YOMV的基因组全长序列如SEQ ID NO.11所示。本发明首次利用无缝克隆、酵母同源重组等技术构建油菜花叶病毒侵染性克隆载体和携带GFP基因的油菜花叶病毒侵染性克隆载体，将有助于在分子水平上研究病毒与寄主互相作用的机制研究以及能够直观观察病毒侵染寄主的过程。
- TaZFP2基因用于提高植株对Cd耐受的应用-202310482818.0
- 张怡;李成伟;李俐俐;徐克东;胡春红;王丹峰;罗奇;郑晓红;雷杰 - 周口师范学院
- 2023-05-03 - 2023-08-22 - C12N15/83
- 本申请涉及农业生物技术领域，具体涉及TaZFP2基因用于提高植株对Cd耐受的应用。本申请以酵母和小麦为研究材料，通过在酵母培养基中加入不同浓度的Cd离子筛选Cd胁迫小麦根系酵母双杂交文库，获得小麦Cd胁迫应答相关基因TaZFP2，利用病毒诱导的基因沉默技术对相关基因进行功能验证和表型分析，并对TaZFP2进行生物信息学分析，为TaZFP2响应Cd胁迫的功能研究和低积累Cd小麦新品种的培育奠定基础。
- 使用柑橘衰退病毒载体进行外源基因表达-201910930391.X
- 威廉·欧·多森;斯维特拉娜·弗里莫诺娃;卓阿·埃尔默塔 - 佛罗里达大学研究基金会有限公司
- 2012-09-21 - 2023-08-04 - C12N15/83
- 本发明揭示了基于对柑橘衰退病毒的修改、为有益目的用于转染柑橘树的病毒载体。本发明揭示了包括含有一个或多个编码异源性多肽的基因盒的病毒载体。所述基因盒位于病毒基因组上的理想位点，使得增加表达量的同时保存病毒的功能性。本发明同时揭示了用病毒载体转染植物的方法以及被病毒转染的植物的实施例。
- 黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默载体及其在忍冬中的应用-202310663314.9
- 蒲高斌;褚洪月;刘谦;李佳;刘振华;张永清 - 山东中医药大学
- 2023-06-06 - 2023-07-28 - C12N15/83
- 本发明公开了黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默载体及其在忍冬中的应用，属于植物基因工程技术领域。所述黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默载体由pCMV 101质粒、pCMV 201‑de12b质粒和pCMV 301质粒组成，其中，pCMV 101质粒是由CMV RNA 1的cDNA片段与植物表达载体连接而成；pCMV 201‑de12b质粒是由突变改造后的CMV RNA 2的cDNA片段与植物表达载体连接而成；pCMV 301质粒是由CMV RNA 3的cDNA片段与植物表达载体连接而成。所述黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默载体在植物基因沉默中的应用。本发明的黄瓜花叶病毒诱导的基因沉默载体毒性弱，具有快速、高通量、易于操作等优势，可用于忍冬关键基因功能研究。
- ZmCCS基因对玉米耐热性改良的应用及提高玉米耐热性的方法-202310584133.7
- 刘琳;何文博;左志芳 - 深圳大学
- 2023-05-22 - 2023-07-18 - C12N15/83
- 本发明实施例公开了ZmCCS基因对玉米耐热性改良的应用及提高玉米耐热性的方法，通过降低玉米植株中ZmCCS的表达来增强玉米的耐热性。其中，提高玉米耐热性的方法，包括：以pCMV201‑2bN81载体为骨架，构建基于黄瓜花叶病毒CMV的VIGS载体；通过农杆菌将VIGS载体转入至烟草中培养扩繁病毒；利用针刺法将病毒的提取物转入玉米种子以获得ZmCCS沉默表达的转基因玉米株系。本发明为玉米耐热性品种的培育和改良提供了理论基础，在农业生产上具有重要的应用前景。
- 一种油菜的病毒诱导的基因沉默方法-202310289784.3
- 刘志文;杨明煊;王晨晨;李芙蓉;于放;张悦;高潇潇;金朝霞 - 大连工业大学
- 2023-03-22 - 2023-05-23 - C12N15/83
- 本发明公开了一种油菜的病毒诱导的基因沉默方法，属于生物技术领域。本发明首先通过PCR扩增获得油菜的基因保守区域BnBADH基因，再与病毒基因表达载体pTRV2连接，得到pTRV2‑BnBADH表达载体质粒转入感受态农杆菌，验证正确的菌液留存，将pTRV1与所得的菌液按照一定比例混匀，离心，所得沉淀菌体中加入侵染液，摇床培养，将得到的菌液从油菜苗叶片背面于脉络之间注射，培养一段时间后，检测目的基因的表达情况。本发明建立的油菜的pTRV‑VIGS病毒诱导基因沉默的方法下调油菜内源的目标基因的相对表达量，具有简单快速、高通量、易于操作的优势，为以后开展油菜基因功能研究提供了一种新途径和技术支持。
- 一种用于筛选影响瓜类作物嫁接发育相关基因的方法-202211501232.6
- 黄远;张婷;熊木;吴香帅;李玲;王筱;别之龙;李东平;钱欣 - 华中农业大学;西藏绿之源现代农业科技股份有限公司
- 2022-11-28 - 2023-05-23 - C12N15/83
- 本发明涉及生物技术领域，更具体地说涉及一种筛选影响瓜类作物嫁接发育相关基因的方法，包括如下步骤：转化外植体的准备及选择、农杆菌的转化、侵染液的制备、侵染发芽的种子、嫁接及检测、嫁接苗管理与生长发育观察、观察嫁接苗的生长发育情况判断目的基因是否为影响嫁接的基因。该方法不会对苗子造成物理创伤，在达到沉默效果时的苗龄适合于瓜类嫁接。该方法的建立，为研究瓜类作物嫁接基因功能提供一种快速、有效的方法。
- 超长基因在植物中快速表达的方法-202110018664.0
- 徐莺;谢桂兰;田银帅;时小东;刘曦南北;陈放 - 四川大学
- 2021-01-07 - 2023-05-12 - C12N15/83
- 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种超长基因在植物中快速表达的方法。本发明方法根据目的基因，预测蛋白质结构，根据保守结构域及活性位点的位置，兼顾病毒承载量，选择合适的拆分位点，将目的基因拆分成几个片段，将拆分后的目的基因片段分别构建重组表达载体，将各重组表达载体转化植株，即可实现超长基因的快速表达，从而克服了病毒表达载体受表达载量限制无法实现超长基因表达的缺陷。
- 竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用-202310105479.4
- 顾连峰;王柏杰;包明川;金炎冬;张航晓;赵良真 - 福建农林大学
- 2023-02-13 - 2023-05-02 - C12N15/83
- 本发明提供了一种竹花叶病毒介导的外源表达系统及其应用，属于基因工程技术领域。所述外源基因表达系统的元件包括竹花叶病毒基因组、pCAMBIA1302线性化载体、ORF5亚基因组启动子、RNA沉默抑制子P19、T2A自剪切肽、外源基因和农杆菌GV3101。该过表达体系能够被应用于毛竹和麻竹基因功能研究，可为竹类分子育种提供科学指导。
- 鉴定牡丹花芽内休眠解除相关基因功能的方法及基因PsmiR172b应用-202211283962.3
- 盖树鹏;张玉喜;张涛;王新宇;袁延超;刘春英;李峰 - 青岛农业大学
- 2022-10-20 - 2023-05-02 - C12N15/83
- 本发明公开了一种鉴定牡丹花芽内休眠解除相关基因功能的方法及基因PsmiR172b应用，属于植物基因工程技术领域，所述方法通过构建目标基因VIGS载体转化农杆菌EHA105，牡丹花芽消毒处理后，利用农杆菌侵染牡丹花芽，在1/2MS+100mM乙酰丁香酮培养基上，8℃黑暗条件共培养3d，转移到1/2MS+200mg/mL特美汀培养基上光照培养，5天后检测目标基因表达量和花芽生长状态。本发明创造性的将组织培养和VIGS结合起来，并根据沉默目标基因后花芽相对生长量变化鉴定休眠解除相关基因，避开了牡丹组培再生困难、童期长、休眠状态下无法直接侵染等问题，实现了休眠解除相关基因的快速鉴定。
- 茶树网斑病毒侵染性克隆及其VIGS载体构建方法和应用-202211423011.1
- 郝心愿;任恒泽;王新超;杨亚军;王璐 - 中国农业科学院茶叶研究所
- 2022-11-15 - 2023-04-21 - C12N15/83
- 茶树网斑病毒侵染性克隆及其VIGS载体构建方法和应用，属于基因工程技术领域。侵染性克隆包含茶树网斑病毒(TPLPV)三个组分全长cDNA重组质粒，分别为pTPLPV1、pTPLPV1和pTPLPV3。pTPLPV3可用于插入外源基因片段构成TPLPV的VIGS载体，通过农杆菌介导法进行pTPLPV3‑VIGS单独接种或与前两条链混合侵染，可以沉默模式植物烟草的NbPDS基因并产生白化沉默表型，单独侵染可以沉默茶树CsPDS基因并产生白化沉默表型。本发明首次将茶树病毒TPLPV改造成侵染性克隆和VIGS载体，为研究该病毒蛋白功能、致病机理及沉默载体的构建和改造提供了工具载体和技术支撑。
- 一种木薯普通花叶病毒诱导的基因沉默系统及其应用-202110126205.4
- 庹德财;沈文涛;周鹏;言普;赵光远;黎小瑛 - 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
- 2021-01-29 - 2023-04-11 - C12N15/83
- 本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种木薯普通花叶病毒(Cassavacommonmosaicvirus,CsCMV)诱导的基因沉默系统及其应用。本发明基于CsCMV构建了可以在植物中有效使用的新的VIGS载体，可应用于CsCMV能侵染的植物基因功能的研究。通过农杆菌介导沉默植株的表型显示：本发明基因沉默载体能够成功侵染植物并对相关基因进行有效的转录后沉默，克服了木薯遗传转化周期长、难度大等困难，为木薯等植物的基因功能研究提供强有力的工具，对木薯或其他植物的功能基因组研究具有重要科学意义和应用前景。
- 四组分BSMV超表达棉花基因载体的应用及构建方法-202110626933.1
- 师恭曜;田保明;位芳;陈薇薇;黄超林;张斌;谢正清;曹刚强 - 郑州大学
- 2021-06-04 - 2023-03-10 - C12N15/83
- 本发明公开了一种四组分BSMV超表达棉花基因载体的应用及构建方法，BSMV超表达载体在建立棉花亚细胞定位标记系的应用，BSMV侵染棉花介导的超表达载体的构建方法步骤为：构建Ti瞬时表达载体；基于Ti瞬时表达载体，构建BSMV超表达载体。本发明的四组分BSMV超表达棉花载体所得到的亚细胞定位标记体系荧光信号更强，利用BSMV超表达棉花基因载体侵染棉花所获得的定位结果更为清晰明了，在不同植物组织中能够检测到定位信息。
- 鉴定牡丹授粉受精基因的VIGS沉默体系-201911112672.0
- 郝青;刘鹏;王奎玲;刘庆华 - 青岛农业大学
- 2019-11-14 - 2023-02-17 - C12N15/83
- 本发明公开了鉴定牡丹授粉受精基因的VIGS沉默体系。本发明所提供的鉴定牡丹授粉受精基因的VIGS沉默体系，包含：在VIGS沉默载体上插入目的基因得到的重组载体；所述目的基因为序列表中序列1所示核苷酸序列和/或序列表中序列3所示核苷酸序列。本发明利用同源克隆技术克隆了牡丹授粉受精基因PoMYB1和PoMYB2保守区段作为靶基因构建TRV2载体，成功建立了VIGS沉默体系，有效地降低了这两个基因的表达量。本研究结果对牡丹基因功能研究具有重要意义，也为解析牡丹授粉受精过程的分子机制奠定了基础。
- 侵染性植物弹状病毒载体及无转基因植物基因组定点编辑的方法-202180007363.6
- 李正和;马晓楠;王硕;彭幸幸 - 浙江大学
- 2021-02-23 - 2022-11-25 - C12N15/83
- 本发明公开了一种利用植物弹状病毒载体对植物染色体DNA进行定点修饰的方法及病毒载体组合物。本发明提供了对植物基因组目的DNA进行定点编辑的方法，该方法无需引入选择性标记基因，包括如下步骤：利用植物弹状病毒载体系统侵染植物并表达序列特异性的核酸酶，所述序列特异性核酸酶靶向所述被侵染植物基因组靶位点并切割靶位点，植物的DNA修复机制完成对所述靶位点的定向编辑。本发明利用植物弹状病毒表达载体递送序列特异性核酸酶，不仅提高了对靶位点的编辑效率，而且可获得非转基因的可稳定遗传的编辑植株。
- 一种以太子参TuMV-phe病毒基因为基础修饰改造病毒表达载体的方法-202110548661.8
- 李明杰;古力;杨小文;孙瑞斌;许启棉;王建明;林文明;林梅桂;袁飞越;张立栋;张重义 - 福建农林大学;福建天人药业股份有限公司;焦作市玖道种苗繁育有限公司;泰宁县古农堂生物科技有限公司
- 2021-05-20 - 2022-11-22 - C12N15/83
- 本发明提供了一种以太子参TuMV‑phe病毒基因为基础修饰改造病毒表达载体的方法，利用太子参TuMV‑phe病毒基因组作为基础，将其改造成能够接收和携带外源基因的太子参病毒表达载体。将测试的指示性基因插入太子参特异TuMV‑phe载体，通过农杆菌介导方法侵染太子参和烟草，可以在2种植物体内快速表达外源基因蛋白产物。本发明方法规避了侵染、组织再生和阳性筛选等常规转化方法复杂冗余的流程，实现了在常规遗传转化体系难以进行的植物中高效表达基因瓶颈，所构建的病毒载体具有简单、快速、高效、特异性强、受体基因种类广等特点，为后续在太子参中高效表达具有药用和经济价值的蛋白提供了有效的技术平台。
- 基于TRV的CRISPR/Cas12a基因组编辑载体的构建与应用-202210682700.8
- 廖乾生;郭歌;赖家良;杜志游 - 浙江理工大学
- 2022-06-16 - 2022-10-11 - C12N15/83
- 本发明涉及分子生物学领域，本发明公开了一种基于TRV的CRISPR/Cas12a基因组编辑载体构建方法：利用质粒pTRV2e
- 一种可进行植物多基因编辑的病毒载体及其构建方法和应用-202010217461.X
- 刘超超;王琼 - 江苏科技大学
- 2020-03-25 - 2022-09-23 - C12N15/83
- 本发明提供了一种可进行植物多基因编辑的病毒载体及其构建方法和应用，涉及植物基因编辑技术领域；将tRNA、sgRNA依次连接构成单元序列，连接载体pCE2；使用“金门”克隆方法，将靶标基因的靶序列插入到每个单元序列的tRNA与sgRNA之间，并且多个所述单元序列串联排列，此串联序列插入到TRV2病毒载体中，TRV侵染过量表达Cas9蛋白的植株后，组装有不同目标靶序列的tRNA‑sgRNA表达序列单元获得转录，完成多基因编辑过程，可实现多个基因的编辑或者根据目标进行不同基因的组合编辑。本方法使植株中能翻译成正常蛋白序列的mRNA表达量更低、基因沉默表型更稳定，且可同时精确靶向敲除多个基因。
- 抗菊花白色锈病基因沉默表达载体及其构建方法和应用-202210745882.9
- 毛洪玉;祝朋芳;刘迪;李雪莹;匡安婵;陈琪 - 沈阳农业大学
- 2022-06-29 - 2022-09-09 - C12N15/83
- 本发明属于植物基因工程技术领域，具体公开了一种抗菊花白色锈病基因沉默表达载体及其构建方法和应用，通过构建该基因的沉默表达载体pTRV2‑CmWRKY15‑1，能快速高效地对CmWRKY15‑1基因进行沉默，获得有效的瞬时基因沉默植株，为研究基因功能提供了一个有效的方法；另外，本发明采用浸泡菊花组培苗接种方式，避免叶背注射渗透法在注射过程中造成的机械损伤引起WRKY转录因子的非生物胁迫应答，本发明操作简单、周期短。
- 甜瓜蚜传黄化病毒侵染性克隆重组载体-202011382169.X
- 刘莉铭;古勤生;彭斌;康保珊;吴会杰 - 中国农业科学院郑州果树研究所
- 2020-12-01 - 2022-07-22 - C12N15/83
- 本发明提供了甜瓜蚜传黄化病毒侵染性克隆重组载体，涉及生物领域。该重组载体中含有MABYV病毒的基因组全长序列，所述MABYV病毒可为能侵染瓠瓜、甜瓜、西瓜和/或黄瓜的病毒，如，所述基因组全长序列的克隆如SEQ ID NO.1所示。本发明克服了现有技术的不足，发现：MABYV基因组基因难以一步克隆至质粒，发明人设计采用同源重组和定点插入相结合的策略才成功；本发明克隆病毒基因组载体侵入植物后，通过观察植物数周，最终鉴定其能侵染植物、使其发病。本发明可用于甜瓜蚜传黄化病毒致病性相关研究，也可用于瓜类作物甜瓜蚜传黄化病毒抗性鉴定，推进了该病毒相关的致病机理和瓜类抗病机理的研究。
- 一种珊瑚菜PDS基因VIGS沉默体系及其构建方法和应用-202011227917.7
- 李莉;周义峰;梁呈元;房海灵;亓希武;于盱;柏杨;刘冬梅 - 江苏省中国科学院植物研究所
- 2020-11-05 - 2022-07-12 - C12N15/83
- 本发明公开了一种珊瑚菜PDS基因VIGS沉默体系及其构建方法和应用，属于生物技术领域。本发明通过构建含有珊瑚菜PDS基因特异性片段的pTRV II病毒沉默表达载体质粒，协同pTRV I质粒，通过农杆菌介导法侵染珊瑚菜组培苗，使珊瑚菜PDS基因发生沉默，有效降低了PDS表达水平，导致叶片白斑白化表型。本发明在珊瑚菜中建立了快速、有效的VIGS病毒沉默体系，操作简单，实验周期短，有效解决验证珊瑚菜基因功能的问题。
- 转录因子ORCA3沉默型长春花培养体系的构建方法及其应用-202110004397.1
- 朱建华;于荣敏;徐吕 - 朱建华
- 2021-01-04 - 2022-07-08 - C12N15/83
- 本发明是转录因子ORCA3沉默型长春花培养体系的构建方法及其应用。主要步骤包括通过病毒介导的基因沉默技术将含有大麦条纹花叶病毒遗传信息的ORCA3沉默载体通过农杆菌侵染烟草植株，将表达出来的ORCA3基因沉默相关蛋白接种于长春花叶片上，以沉默长春花中ORCA3的表达，通过qRT‑PCR检测ORCA3沉默后TIAs生物合成关键酶基因的表达情况。ORCA3侵染烟草后，实验组叶片出现白斑，伴随着叶片不同程度的卷曲，并且还出现了褪绿发黄的现象；病毒蛋白接种长春花后，长春花叶片也出现发黄的现象；qRT‑PCR实验结果表明，相比较于对照组，长春花中的TIAs生物合成关键酶基因表达量除了SGD外均有大幅度下降，其中D4H，G10H，GES，IRS，LAMT，STR，TDC的表达量分别为对照组的0.24，0.10，0.37，0.89，0.04，0.001，0.09倍。
- 一种杨树花叶病毒VIGS载体的中间体基因组序列的获取方法及其应用-202110127728.0
- 赵嘉平;苏晓华;张冰玉;张一南;李敏;李金鑫;王黎;申宛娜 - 中国林业科学研究院林业新技术研究所;中国林业科学研究院林业研究所
- 2021-01-29 - 2022-07-08 - C12N15/83
- 本发明提供一种导致杨树花叶病毒的菜豆普通花叶病毒基因组序列及其应用，本发明采用RT‑PCR方法在接种绿豆叶片中获得菜豆普通花叶病毒基因组近全长序列，并采用菜豆普通花叶病毒特异性引物实现病毒的鉴定和检测,并提供了菜豆普通花叶病毒caf株系特异性鉴定引物，实现了病毒的快速识别和鉴定。
- 植物单基因或多基因CRISPR激活技术的载体及构建方法、应用-202210208222.7
- 刘超超;骆少丹;赵曜 - 江苏科技大学
- 2022-03-04 - 2022-06-14 - C12N15/83
- 本发明公开了植物单基因或多基因CRISPR激活技术的载体及构建方法、应用，所述载体为能表达sgRNA的TRV2载体；TRV2载体内包含表达sgRNA2.0的模块proPeBV‑BsaI‑BsaI‑sgRNA2.0，序列如SEQ ID NO.9所示；其中，两个BsaI位点为sgRNA插入位点，采用序列如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示的引物扩增SEQ ID NO.9序列，并插入到TRV2载体多克隆位点，获得表达sgRNA2.0模块的TRV2‑SG2.0。本发明所述载体只需完成一次番茄遗传转化，获得SlAct3.0line植株后，仅需针对不同的靶标基因构建含有靶向其启动子区sgRNA的TRV2载体，并侵染SlAct3.0line植株，在3周内即可快速高效的获得不同靶基因的过表达植物材料，而通过传统的遗传转化获得基因过表达植株则需要将近1年的时间，因此该方法更加快捷高效，省时省力，极大缩短了试验周期。
- 专利分类
